高富红，高艳艳，周德刚

（国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳高新区惠中兽药471003）

复方中药由淫羊藿、黄芪、女贞子、甘草等多种成分组成，方中淫羊藿具有调节免疫、改善心血管系统等功能；黄芪具有增强机体免疫、利水消肿等作用，并能使动物脾内浆细胞增生，促进抗体合成，对体液免疫功能有促进作用；女贞子具有提高机体抗体水平的作用；甘草具有补脾益气、调和诸药的功能。然而复方中药是否也对机体免疫功能造成影响尚未证实，本研究探讨了复方中药对小鼠多项免疫指标的影响，旨在全面了解其对动物机体免疫系统的作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料 健康未交配的昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，购自河南省康达实验动物有限公司，许可证号：SLXK（豫）2011-0001。试验前观察一周，灭菌全价颗粒饲料喂养，饮用消毒处理的自来水，室温20～24℃，相对湿度40～60%。挑选健康活泼的小鼠100只（雌雄各半）用于试验。

仪器：XF9080A动物血液细胞分析仪，南京普朗医用设备有限公司；电子天平，型号：JA2003，上海上平仪器厂；离心机TGL-16G，金坛市科兴仪器厂。

试剂：复方中药：国家兽用药品工程技术研究中心中药所提供，批号：20120901；环磷酰胺(CY)：江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：12030725；绵羊红细胞(SRBC)悬液：由健康绵羊颈静脉取血，以0.9%氯化钠液洗涤3次后配成所需浓度；补体：采集豚鼠血液，离心，分离血清，用生理盐水配成10%，即为补体（1：10），批号为20120905。都氏试剂：碳酸氢纳1.0g，氰化钾0.05g，高铁氰化钾0.2g，加蒸馏水至1000m l，所用试剂均为市售分析纯，购自莱阳市双双化工有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 小鼠分组及给药方法 取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只。分别为正常组(A组)、模型组(B组)，复方中药低(C组)、中(D组)、高剂量组(E组)。各组给药方法如下：

正常组（A组）：生理盐水25m1·kg-1·d-1灌胃，连续10d，于给药第7天起给予生理盐水腹腔注射10m1·kg-1·d-1，连续3d。

模型组（B组）:生理盐水25m1·kg-1·d-1灌胃，连续10d，于给药第7天起给予环磷酰胺腹腔注射10m1·kg-1·d-1，即50mg·kg-1·d-1，连续3d，制造小鼠免疫抑制模型[1]。药物(复方中药低、中、高剂量)组（C、D、E组）：复方中药剂量分别为8.5g·kg-1·d-1、17g·kg-1·d-1、34g·kg-1·d-1，即25.5g生药·kg-1·d-1、51g生药·kg-1·d-1、102g生药·kg-1·d-1，连续10d。于给药第7天起给予环磷酸胺，剂量用法同模型组。

1.2.2 外周血白细胞计数 上述各组动物于末次给药结束后24h，摘除眼球采血，用血细胞分析仪测定外周血白细胞。

1.2.3 小鼠免疫器官脏器指数检测[2]上述各组动物于末次给药结束后24h采血后脱臼处死，小心取出完整胸腺，并分离脾脏，去掉筋膜及脂肪组织，用电子天平称胸腺、脾脏重，并计算胸腺指数、脾脏指数。以脾脏和胸腺的重量指数mg/10g（体重）表示，比较组间差异。计算公式如下：胸腺指数或脾脏指数=胸腺或脾脏重量(mg)×10/体重(g)。

1.2.4 对小鼠血清溶血素生成的影响[3]另取小鼠50只进行试验，小鼠分组同1.2.1，先灌胃给药，连续10d。给药第5天小鼠腹腔注射5%绵羊红细胞0.1m1/l0g进行免疫并继续给药。给药第7天起，除正常对照组外，其余各组给予环磷酰胺灌胃50mg/kg造成免疫功能低下，连续3d。于灌胃给药第11天小鼠眼眶取血，分离血清，用生理氯化钠溶液稀释100倍。取稀释血清1m1，加5%绵羊红细胞悬液0.5m l，10%补体0.5m l。空白管用等量生理盐水代替血清，混匀，在37℃恒温箱中保温30min，然后移至冰浴中终止反应。3000r/min离心10min，取上清液1ml加都氏试剂3ml，摇匀放置10min，于540 nm波长处读取吸光度值。依公式计算血清半数溶血值：样品HC50=样品的吸光度值×稀释倍数／SRBC半数溶血值。

1.2.5 统计学处理 所测数据以平均数±标准差（x±s）表示，并用分析软件SPSS11.0分析。

2 结果

2.1 对外周血白细胞数的影响 从测定结果可以看出，与正常组相比，环磷酰胺模型组外周血白细胞数降低，呈显著性差异。与环磷酰胺组模型相比，复方中药各剂量组外周血白细胞数均有所升高，呈显著性差异。并且复方中药各剂量组间差异不显著。说明复方中药可以使环磷酰胺致免疫低下小鼠外周血白细胞升高。结果见表1：比较P<0.01。

表1 对外周血白细胞数的影响（x±s）

2.2 对免疫器官脏器指数的影响 与正常组比较，环磷酰胺模型组胸腺、脾脏免疫器官脏器指数均降低，呈显著性差异，说明环磷酰胺模型组小鼠免疫功能低下。与环磷酰胺模型组相比，复方中药除低剂量组脾脏指数稍有降低外，其余各剂量组免疫器官脏器指数均有所升高，其中低剂量组差异不显著，中、高剂量组呈显著性差异。结果见表2：

表2 对免疫器官脏器指数的影响（x±s）

2.3 对血清溶血素生成的影响 环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下后，复方中药各剂量组均能促进小鼠血清溶血素的生成，随着复方中药剂量的增加，对小鼠血清溶血素的生成影响越显著。并且与环磷酰胺组相比，低剂量组差异不显著，中、高剂量组呈显著性差异。结果见表3：

表3 对血清溶血素生成的影响（x±s）

3 讨论

机体的免疫由特异性免疫和非特异性免疫所组成[4]。非特异性免疫是特异性免疫的基础，特异性免疫所产生的免疫物质又能增强非特异性免疫的作用，因此，在研究中至少观察体液免疫及细胞免疫功能各一种，才能初步肯定该药物对免疫功能的作用[3]。

白细胞具有吞噬异物、衰老死亡的细胞、病原微生物和抗原抗体复合物的功能，调节机体的非特异性免疫应答。本实验中，复方中药各剂量组与环磷酰胺组相比，外周血白细胞数均有所升高，呈显著性差异。说明复方中药可以调节环磷酰胺致免疫低下小鼠的非特异性免疫应答，提高其免疫功能。

免疫器官相对质量的变化在免疫评价中占有重要地位，如研究结果与其它免疫指标一致，则该结果更为可靠，常供药物初筛实验时用。从本实验结果可以看出，复方中药中、高剂量组均能提升环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫器官指数。

小鼠血清溶血素水平是一项机体特异性免疫功能的主要指标[5-6]，检测致敏动物血清中溶血素的含量，可以反映药物对体液免疫的影响[7]。它反映了B细胞的增殖以及和补体结合后向体液中分泌溶血素的能力[8]。实验表明，复方中药中、高剂量组均能提升环磷酰胺致免疫低下小鼠的血清溶血素水平。

4 结论

复方中药中、高剂量组能显著提高环磷酰胺致免疫低下小鼠的外周血白细胞数，提高其免疫器官指数及血清溶血素水平，说明复方中药对免疫抑制小鼠的免疫功能有一定的增强作用，是一种良好的免疫增强剂。

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