罗明华　谢天资　张卢水　等

摘要：为了为四川省引进和培育金银花品种提供依据，采用高效液相色谱法，比较不同品种金银花的绿原酸含量。结果表明，从山东省引进的九丰一号、大毛花和从河南省引进的豫封一号的绿原酸含量分别为3.72%、3.15%、327%，从重庆市引种至四川省江油市、南江县的渝蕾一号的绿原酸含量分别为7.12%、6.94% 它们与原产地没有明显的差异；四川省的细毡毛忍冬中的绿原酸含量高达6.83%。由此可知，九丰一号、大毛花、豫封一号、渝蕾一号为优良的金银花品种，适合引至四川省栽培；作为乡土品种，细毡毛忍冬有很好的培育价值。

关键词：四川省；金银花；种质；绿原酸

中图分类号： S567.7+90.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0311-02

收稿日期：2014-08-06

基金项目：国家大学生创新创业训练计划（编号：201310639001）；四川省科技厅应用基础研究计划（编号：2013JY0078）；四川省生态安全与保护重点实验室开放基金（编号：ZDS 1008）。

作者简介：罗明华（1964—），男，四川眉山人，博士，教授，主要从事药用植物与中药资源的开发利用研究。E-mail：969826049@qq.com。金银花（Flos Lonicerae）为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾，具有清热解毒、凉散风热之功效，用于治疗外感风热或温病初起、热毒下痢、肺热咳嗽等[1]。在我国，作为中药金银花流通及使用的品种非常复杂[2-3]。四川省地处中国西南地区，为我国金银花的主要产区之一，四川省南江县的金银花曾经闻名全国，但经鉴定为细毡毛忍冬[4]。2005年版和2010年版《中华人民共和国药典》（以下简称《药典》）中将金银花和山银花作为2个品种[1，5]分别收载后，对四川省金银花的栽培影响很大。由于主要栽培品种不是《药典》收载品种，四川省金银花的市场销售情况并不好，导致价格低，栽培面积减少，于是四川省的金银花种植企业和农户开始从外省引进金银花品种，根据笔者近2年的调查和文献记载[6]可知，目前四川省既有引进的山东省、河南省和重庆市的栽培品种，又有四川省当地驯化栽培的品种。近年来的化学和药理研究结果证实，绿原酸是金银花的主要活性成分之一[7]，因此金银花的绿原酸含量，是判断其质量的重要标志。笔者对四川省栽培的不同种质金银花的绿原酸含量进行测定比较，以期为筛选出适合四川省栽培的品种提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料

分别于2013年5月中下旬在山东省平邑县、河南省封丘县、重庆市秀山县和四川省北川县、江油市、南江县等地的金银花种植公司、金银花专业合作社的种植基地或农户种植田间共收集19份栽培的种质材料，详见表1。每个种质材料均采样30份以上，全部采集头茬花蕾快速烘干备用。同时采集标本，并将所有标本送交绵阳师范学院罗明华教授鉴定。

1.2试验方法

1.2.1试验仪器与色谱条件试验仪器为美国Agilent 1100型高效液相色谱仪 （包括Agilent化学工作站）、十万分位电子天平（型号：XS205mettlerToledo）、万分位电子天平（型号 BSA224S-CW）。色谱柱为Phenomenex C18柱（250 mm×46 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（体积比为13 ∶87），柱温为25 ℃，检测波长为327 nm。临用前以0.45 μm 微孔滤膜过滤并经超声脱气处理，流速为 1.0 mL/min，进样量20 μL，理论塔板数（以绿原酸计）不低于1 500。

1.2.2对照品溶液的制备精确称取8.55 mg绿原酸对照品 （批号为110753—201314，纯度以96.6%计算），以2010年版《药典》中规定的中间浓度为依据，将绿原酸对照品在 40 mL 的容量瓶中定容，配制成0.206 5 mg/mL的绿原酸对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的制备将每个种质材料样品充分混匀，取约0.5 g样品粉末（过4号筛）置于50 mL容量瓶中，加 50 mL 50%甲醇，超声40 min，放冷后定容、摇匀。用滤纸过滤后，取5 mL滤液，置于20 mL容量瓶中定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤。

1.2.4标准曲线的绘制以中间量为20 mL的进样量为基准，按不同进样量的梯度，分别设计以下几个进样量：5、10、20、40、50、60 μL。以峰面积对进样量进行线性回归，回归方程为：y=39.425x+2.354 6，其中r2=1.00，说明绿原酸进样量在1.032 5～12.390 0 μg范围内线性关系良好。

1.2.5稳定性试验取配制好的绿原酸对照品溶液，每4 h进样1次，共进样6次，每次进样10 μL，RSD=1.14%（n=6）。表明本试验条件稳定，绿原酸含量在24 h内稳定性良好。

1.2.6精密度试验精确吸取绿原酸对照品溶液，每次 10 μL，连续进样5次测定峰面积值，算得绿原酸含量的RSD为0.57%（n=5）。表明本试验方法精密度良好。

1.2.7加样回收试验精确称取5份已知绿原酸含量 （80250 mg/g） 的样品，分别置于25 mL具塞锥形瓶中，准确表119份金银花种质材料概况

样品编号品种名采集地采集时间

加入一定量的绿原酸对照品溶液 （合0.62 mg绿原酸 ），按供试液制备方法制样并测定、进样分析。

1.2.8样品绿原酸含量的测定按上述色谱条件，精确吸取各供试样品20 μL，依次分别进样（n=3），测定样品中绿原酸的含量。

2结果与分析

2.1加样回收测定结果

表2为加样回收试验测定结果。分析表明，平均回收率98.06%，RSD=1.02%。endprint

表2加样回收试验测定结果（n=5）

称样量

（g）样品量

（mg）加入量

（mg）测得量

（mg）回收率

（%）9.230.7410.6201.34998.29.690.7880.6201.39197.48.690.7370.6201.34197.58.870.7380.6201.32697.49.500.8010.6201.38099.8

2.2样品绿原酸含量

本试验比较了5个金银花品种在原产地和四川省栽培后的含量，由表3可以看出，山东省的大毛花、九丰一号，河南省的豫封一号引种栽培在四川省的质量表现较好，高出《药典》规定的100%以上；沂蒙四号和鸡爪花在原产地含量高，引种含量明显降低，但能达到《药典》要求（2010年版《药典》规定金银花中绿原酸含量不低于1.5%）。

灰毡毛忍冬是山银花的来源品种之一，本试验还比较了灰毡毛忍冬及其培育的品种渝蕾一号的绿原酸含量。由表3可知，四川省栽培的灰毡毛忍冬品种，绿原酸含量明显高出《药典》规定；渝蕾一号是由灰毡毛忍冬培育出的品种，它们的含量高于灰毡毛忍冬；渝蕾一号引种到四川省江油市后，含量高于原产地；引种到四川省南江县后，质量表现较好，与原

表3各样品绿原酸含量（n=3）

样品编号含量

（%）RSD

（%）13.152.2423.092.8931.651.1543.142.1353.721.9763.812.1573.271.7483.311.4697.121.78107.012.28116.940.19122.720.83131.512.08146.832.03153.282.76160.832.77170.782.99183.820.87193.022.81

产地没有明显的区别。

研究还发现，细毡毛忍冬、灰细毡毛忍冬、淡红忍冬、红腺忍冬、峨眉忍冬、异毛忍冬为四川省驯化栽培的品种。其中产于四川省南江县的细毡毛忍冬绿原酸含量高，远远高于《药典》规定的山银花和金银花的标准，这与苟占平等报道的结果[4]一致；红腺忍冬、峨眉忍冬符合《药典》要求，而淡红忍冬、异毛忍冬中绿原酸含量低，达不到《药典》的规定。

3结论

四川省是我国金银花的主要产区之一，四川省产的金银

花习称川银花。四川省要发展金银花产业，就要采取引进优良品种和培育本地品种相结合的方法。引种以选择山东省的九丰一号、大毛花和河南省的豫封一号为宜，其优点是产量高、有效成分含量稳定；如果要以提取绿原酸为目的，适宜选择渝蕾一号。此外，2010 年版《药典》将忍冬规定为金银花唯一的来源，将灰毡毛忍冬等置于山银花项下，而未对细毡毛忍冬作任何收载。就性状而言，灰毡毛忍冬和细毡毛忍冬很相似，特别是药用部位的成熟花蕾很难区别，而且其绿原酸含量高，为传统的川产金银花的主流品种[4]，也许将其纳入山银花范围更加合理。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典： 一部[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010 ∶205.

[2]徐炳声. 中药金银花原植物的研究[J]. 药学学报，1979，14（1）：25-36.

[3]潘超逸，谭家铭，赖应涛. 四川省金银花的原植物调查[J]. 中药材，1991，14（9）：17-19.

[4]苟占平，万德光. 四川南江主流金银花的分类学鉴定与质量分析[J]. 四川中医，2009，27（2）：57-58.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005：21，152.

[6]苟占平，万德光. 川产商品金银花调查与鉴定[J]. 四川中医，2008，26（1）：49-51.

[7]郭明，詹敏忠，鲁小旺，等. 金银花活性成分绿原酸与不同蛋白质相互作用机制的比较分析研究[J]. 中国中药杂志，2013，38（16）：2714-2720.李康. 彩棉纤维的成分和结构分析[J]. 江苏农业科学，2015，43（1）：313-314.endprint