石 歆

(河南中医学院第一附属医院内科，河南 郑州 450000)



桔皮素对人非小细胞肺癌细胞生长及侵袭的影响

石 歆△

(河南中医学院第一附属医院内科，河南 郑州 450000)

目的： 探讨桔皮素(TGN)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长和侵袭的影响及其分子机制。方法: 体外培养非小细胞肺癌A549细胞，分别用不同浓度的TGN处理，MTT比色法检测细胞活性，Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell检测细胞侵袭，RT-PCR分析MMP-2和MMP-9 的mRNA表达水平，Western blotting检测Ki67、Cyt C、caspase-3、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9、Akt、p-Akt以及p-PI3K表达水平。结果: 桔皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖(P<0.05)，同时伴随有增殖标记分子Ki67表达水平的下调。分析发现，桔皮素诱导细胞中Cyt C、caspase-3和cleaved caspase-3的表达上调(P<0.01)，加速A549细胞的凋亡。此外，桔皮素作用后，A549细胞中侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达量下降，且侵袭数目随桔皮素浓度增加而减少。进一步研究表明，桔皮素作用后A549细胞中p-Akt和p-PI3K表达水平降低(P<0.05)，阻断PI3K/Akt信号通路后，不同浓度TGN对细胞活性影响没有变化。结论: 桔皮素能抑制A549细胞生长及侵袭，促进细胞凋亡，可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活起作用。因此，本研究将为非小细胞肺癌的防治提供新的研究方向。

桔皮素； 非小细胞肺癌； 细胞侵袭； PI3K/Akt信号通路

非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)是一种极为常见的恶性肿瘤，占肺癌的80%，有致死率高、预后较差的特点[1]。因此，临床上寻找对非小细胞肺癌有明显抑制作用的药物有非常重要的意义。桔皮素(tangeretin, TGN)属黄酮类化合物，来源于芸香科川橘果皮、酸橙果皮和柑橘茎叶等，具有抗真菌作用。近年来，体外研究证实桔皮素对结肠癌和乳腺癌细胞发生发展有明显抑制作用[2-3]，但是桔皮素对非小细胞肺癌的作用及其机制尚不清楚。因此，本文拟探究桔皮素对非小细胞肺癌A549生长、侵袭的影响，并分析潜在的作用机制，从而为非小细胞肺癌的防治提供新的研究靶向。

材 料 和 方 法

1 材料与试剂

A549细胞株由本实验室提供；桔皮素购于天津化标生物技术有限公司，DMSO、MTT和SDS、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒均购于Sigma；RPMI-1640培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购于Gibco；DMEM高糖培养基购于Hyclone；蛋白激酶B(protein B, Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)多克隆抗体购于Santa Cruz；……