彭晴霞， 杨碧莹， 潘经锐， 王鸿轩， 黎祥喷， 王艺东△

(1中山大学孙逸仙纪念医院神经科， 2广东省中医院神经四科，广东 广州 510120)



氧葡萄糖剥夺-再恢复后抑制小胶质细胞TLR9激活对神经元的保护作用*

彭晴霞1， 杨碧莹2， 潘经锐1， 王鸿轩1， 黎祥喷1， 王艺东1△

(1中山大学孙逸仙纪念医院神经科，2广东省中医院神经四科，广东 广州 510120)

目的： 观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)后小胶质细胞BV-2 Toll 样受体9(TLR9)激活对神经元凋亡的影响。方法: 对BV-2细胞或TLR9-siRNA转染的BV-2细胞进行OGDR处理4 h后，将细胞上清添加至OGDR处理4 h的小鼠原代皮层神经元中，继续正常培养24 h后，倒置显微镜下观察神经元形态变化，TUNEL染色检测神经元凋亡，Western blotting 检测神经元caspase-3蛋白的表达。实验分为正常BV-2组、negative control-siRNA组、TLR9-siRNA组、OGDR组、OGDR+NC-siRNA组、OGDR+TLR9-siRNA组和对照组(神经元OGDR后不添加BV-2细胞上清)。结果: OGDR后神经元胞体肿胀，折光性下降，出现空泡样变，轴突变细、扭曲、断裂。TUNEL染色各组均可见绿染凋亡小体。与对照组比较，其它组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)；与正常BV-2组比较，OGDR组和TLR9-siRNA组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)；OGDR+TLR9-siRNA转染组与TLR9-siRNA转染组和OGDR组比较，caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论: OGDR后BV-2细胞TLR9激活致神经元凋亡增多，caspase-3蛋白表达升高；抑制TLR9表达后，神经元损伤减轻。

氧葡萄糖剥夺-再恢复； 小胶质细胞； 神经元； Toll 样受体9

Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是先天免疫系统的重要组成部分，在启动机体的炎症反应中起着重要作用[1]。脑缺血再灌注损伤中炎症反应占据重要地位。近年来的研究发现TLR2和TLR4表达上调与脑缺血的严重性相关，基因敲除动物的脑缺血转归更好[2]。我们在前期研究中观察到，脑梗死小鼠梗死灶外周组织TLR9选择性地在小胶质细胞内激活[3]，氧葡萄糖剥夺-再恢复(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGDR)后小胶质细胞(BV-2细胞)的TLR9表达增加[4]。脑缺血再灌注后小胶质细胞TLR9的激活是否对神经元产生作用，影响缺血组织的转归，目前还未见研究报道。……