杨 松,张 伶，邹 韬,杨兴明,赵冰海,陈科宇(.四川省南充市红十字中心血站 637000；.重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学教育部重点实验室/重庆市重点实验室 40006)



南充市Rh阴性献血者血清学表型和不规则抗体调查*

杨 松1,张 伶2，邹 韬1,杨兴明1,赵冰海1,陈科宇1(1.四川省南充市红十字中心血站 637000；2.重庆医科大学检验医学院/临床检验诊断学教育部重点实验室/重庆市重点实验室 400016)

目的 调查南充市Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体情况。方法 应用血型血清学方法对初检Rh阴性的献血者进行Rh阴性确认、血清学表型鉴定及不规则抗体筛选鉴定。结果 在433份送检标本中共确认Rh阴性402份(92.8%)，检出D变异体23份(5.3%)，其余8份(1.9%)为检验科RhD检测错误；共检出不规则抗体12份，在Rh确认阴性献血者中检出7份抗-D(1.7%)；Rh阴性献血者的血清学表型分布结果主要以dccee和dCcee为主，其余为dCCee、dccEe和dCcEe。结论 通过本次调查，掌握了南充市Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体的分布情况，保障了临床Rh阴性患者输血安全性、有效性和及时性。

Rh阴性； D变异体； 血清学表型； 不规则抗体

Rh血型系统是人类最具多态性的血型系统，其临床意义仅次于ABO血型系统，可以引起溶血性输血反应、新生儿溶血病及自身免疫性溶血性贫血等[1]。四川省南充市红十字中心血站对Rh阴性无偿献血者群体进行了重要抗原分型及不规则抗体的检测，从而建立本地区的Rh阴性无偿献血者血型血清学档案库，有助于血站对Rh阴性无偿献血者群体的科学管理，为临床输血的安全性、有效性和及时性提供保障，避免血液浪费。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2010年4月至2014年9月南充市无偿献血者经四川省南充市红十字中心血站检验科初检Rh阴性标本共433份(重复献血者只计为1份)，待确认标本为同源血袋导管内血液，送至输血研究室进行确认，全血枸橼酸盐抗凝。

1.2 仪器与试剂 抗-D(IgM)、抗-D(IgG)、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、多特异性抗IgG+C3d、筛选细胞、谱细胞均为上海血液生物医药有限公司产品；凝聚胺介质试剂采用珠海贝索生物技术有限公司产品；抗-D(IgM+IgG)采用英国Millipore公司产品；人源抗-D采用江阴力博医药生物技术有限公司产品；血型血清学专用离心机KA-2200采用日本久保田公司产品；血库标准化离心机2005-1采用珠海Baso产品。

1.3 Rh阴性筛选及确认试验 抗-D试剂(IgM)采用试管盐水法对送检标本进行复核，随后采用3种不同厂家的抗-D(IgG)试剂做抗人球蛋白试验进行确认。

1.4 抗体筛选和鉴定 使用筛选细胞，采用试管盐水法和凝聚胺法对所有送检标本血浆进行不规则抗体筛选，如检出不规则抗体的存在，再用谱细胞通过抗人球蛋白法进行抗体鉴定。

1.5 Rh血清学表型鉴定 分别用抗-C、抗-c、抗-E、抗-e单克隆试剂，采用试管盐水法对送检标本进行Rh系统重要抗原分型。

2 结 果

2.1 Rh阴性确认情况 在433份送检标本中共确认Rh阴性402份(92.8%)，检出D变异体23份(5.3%)，其余8份(1.9%)为检验科RhD检测错误。

2.2 抗体筛选和鉴定情况 共检出不规则抗体12份，在Rh确认阴性献血者中检出7份抗-D(1.7%)，其余为3份抗-P1，1份抗-M，1份冷自身抗体。而在D变异体和RhD检测错误标本中均未检出不规则抗体。

2.3 Rh阴性献血者血清学表型分布结果 共检出5种表型，其中dccee为201份(50.0%)，dCcee为150份(37.3%)，dCCee为35份(8.7%)，dccEe为11份(2.7%)，dCcEe为5份(1.3%)。

3 讨 论

人类Rh血型系统的临床意义仅次于ABO血型系统，也是最具多态性的血型系统。Rh血型系统中与临床输血关系密切的主要是D、C、c、E、e等5种抗原，D免疫原性最强，其次是E抗原。红细胞表面上有D抗原的称为Rh阳性，缺乏D抗原的称为Rh阴性。但研究发现，D抗原存在多种变异体，包括弱D、部分D和Del型，D变异体的分子机制和临床意义得到了输血工作者的高度重视。近年来，相关文献陆续报道，输注D变异体红细胞可使Rh阴性患者产生抗-D，甚至D抗原数量极少的Del型红细胞也会引起免疫反应[2-3]。

笔者从433份送检标本中共确认Rh阴性402份，同时发现23份D变异体和8份检测错误，分别占送检标本的5.3%和1.9%。可见，初检为Rh阴性的标本必须进行Rh确认试验，从而排除D变异体和检测错误等情况，如有必要，可进一步通过吸收放散试验排除Del型。中国Rh阴性人群中有较高比例的Del型，姜健等[4]在351份盐水抗-D阴性标本中检出Del型32份。李宏等[5]研究发现，D变异体在四川地区有极其丰富的多态性，且发现了新的等位基因，提示作者进一步研究方向为南充市D变异体形成的分子机制。为了提高Rh阴性血液制剂输注的安全性，作者对Rh阴性献血者群体普查不规则抗体，检出不规则抗体12 份，7份为抗-D。经随访调查这7例献血者均存在免疫史，6例女性献血者有妊娠史，1例男性献血者有输血史。本次调查南充市Rh阴性献血者不规则抗体的检出率为2.99%，在23 份D变异体的血浆中未检出不规则抗体；而周国平等[6]报道，上海市Rh阴性献血者不规则抗体的检出率为0.69%，在66份D变异体的血浆中亦未检出不规则抗体。四川省南充市红十字中心血站对于含有不规则抗体的Rh阴性血液，处置措施为红细胞成分制成洗涤红细胞供应临床，而血浆予以报废或作为科研用途。Rh阴性献血者的血清学表型分布结果表明，主要以dccee和dCcee为主，其余为dCCee、dccEe和dCcEe，本次调查未检出dccEE、dCcEE、dCCEe、dCCEE等表型，与重庆、成都地区分布情况相似[7]，也与东部的青岛、丽水等地区分布情况相似[8-9]。

为适应临床输血发展的要求，四川省南充市红十字中心血站通过建立一支Rh阴性献血者应急队伍，并开展Rh阴性红细胞低温冰冻技术，保障了临床Rh阴性患者的用血及时性。同时，对Rh阴性献血者群体进行血清学表型和不规则抗体调查，建立Rh阴性献血者血型血清学档案库，可尽快地为患者提供配血相合的血液，提高临床Rh阴性患者的用血有效性和安全性。通过本次调查，掌握了Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体的分布情况，并为下一步研究本地区Rh阴性形成的分子机制奠定基础。

[1]徐研，洪缨，郑小芳.成都地区献血人群RhD阴性个体RhD基因分子机制研究[J].中国输血杂志，2014，27(2)：146-148.

[2]Wanger T，Kormoczi GF，Buchta C，et al．Anti-D immunization by DEL red blood cells[J]．Transfusion，2005，45(4):520-526．

[3]Yasuda H，Ohto H，Sakuma S，et al．Secondary anti-D immunization by Del red blood cells[J]．Transfusion，2005，45(10):1581-1584．

[4]姜健，夏卫，郁心，等.无锡地区献血者D变异体的检定结果[J].中国输血杂志，2010，23(11)：942-943.

[5]李宏，宋宁，邓永福，等.四川地区汉族人群Rh(D)变异体分子机制研究[J].中国输血杂志，2010，23(5)：368-372.

[6]周国平，谢云峥，向东，等.上海市Rh阴性献血者D变异型与不规则抗体调查[J].临床检验杂志，2009,27(3):233-234.

[7]王芳，黄霞，毛伟，等.重庆地区献血者RhD阴性血型抗原分布调查[J].国际检验医学杂志，2009，30(2)：199.

[8]潘海平，于琦，张霞.青岛地区Rh阴性献血者表现型分布[J].中国输血杂志，2012，25(9)：875.

[9]庄杰，赵龙友，纪勇平，等.丽水市Rh阴性献血者血清学表型和不规则抗体调查[J].中国输血杂志，2012，25(6)：578-579.

Investigation on serological phenotype and irregular antibody of Rh negative blood donors in Nanchong*

YANGSong1,ZHANGLing2,ZOUTao1,YANGXing-ming1,ZHAOBing-hai1,CHENKe-yu1

(1.NanchongRedCrossCentralBloodStation,Nanchong,Sichuan637000,China;2.DepartmentofLaboratoryScience,ChongqingMedicalUniversity/KeyLaboratoryofLaboratoryScienceofMinisterofEducationofPeople′sRepublicofChina/KeyLaboratoryofChongqing,Chongqing400016,China)

Objective To investigate the serological phenotype and irregular antibody of Rh negative blood donors in Nanchong.Methods Blood group serology was used to reconfirm Rh negative、to screen and identify the serological phenotype and irregular antibody for Rh negative blood donors in primary detectionResults Among 433 specimens,a total of 402 cases(92.8%) were confirmed as Rh negative,23 cases were D variants(5.3%),and the rest 8 cases were check errors(1.9%);Irregular antibodies were found in 12 cases,and 7 cases of anti-D(1.7%) in reconfirmed Rh negative blood donor;The serological phenotype of Rh negative blood donor was given priority to dccee and dCcee,followed by dCCee,dccEe and dCcEe.Conclusion The serological phenotype of the Rh negative blood donors in our region Characterized by diversity ，there was irregular antibodies in Rh negative blood donors.

Rh negative; D variants; serological phenotype; irregular antibody

重庆市科委自然科学基金资助项目(csct2013jcyjA10035)。

杨松，男，主管检验师，硕士，主要从事血型血清学研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.08.006

A

1672-9455(2015)08-1040-02

2014-11-17

2014-12-22)