黄丽霞，马利国，蔡如玉，杨 熠

(深圳市人民医院暨南大学附属第二临床学院妇科，广东 深圳 518020)

子宫内膜异位症患者在位内膜的MMP-9和VEGF的表达

黄丽霞，马利国，蔡如玉，杨 熠

(深圳市人民医院暨南大学附属第二临床学院妇科，广东 深圳 518020)

目的 探索在位内膜是否有异常改变，以证实现有治疗方法的有效性。方法随机选取2013年11月至2014年5月于我院妇科经腹腔镜及病理确诊为子宫内膜异位症的患者40例为内异症组，既往因子宫内膜异位症在我院治疗后未复发的患者38例为治愈组，另选取30例同期健康育龄妇女为对照组。检测并比较三组受检者的基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平。结果内异症组在位内膜MMP-9和VEGF的表达较治愈组和对照组均明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)；治愈组MMP-9和VEGF的表达与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；MMP-9和VEGF的表达存在正相关关系(r=0.805，P＜0.05)。结论内异症患者在位内膜的MMP-9和VEGF的表达异常，促进异位病灶形成；手术彻底切除内异症病灶联合药物治疗后MMP-9和VEGF表达恢复正常，延迟复发。

子宫内膜异位症；在位内膜；基质金属蛋白酶-9；血管内皮生长因子

子宫内膜内异症(Endometriosis，EMs)简称内异症，是育龄妇女的常见病，其发病率可达10%～15%，且呈上升趋势，严重影响妇女的身心健康及生育能力。近年来，随着大量内异症相关临床和基础研究工作的开展，人们对内异症的认识不断深入，临床诊治也逐渐规范，但其发生、发展过程仍是一个未解之谜。从过去经典的Sampson经血逆流学说，到现在的在位内膜在内异症发病中的作用，越来越多的临床和基础研究结果证实，内异症患者在位内膜有诸多方面的异常改变，从而有学者提出“在位内膜决定论”——即在位子宫内膜的异常改变在内异症发病中起着决定性作用。现就这一理论，检测治疗前的内异症患者和治愈后患者在位内膜的基质金属蛋白酶9 (MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达来证明在位内膜是否有异常变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取2013年11月至2014年5月于我院妇科经腹腔镜及病理确诊为子宫内膜异位症的患者40例为内异症组，既往因子宫内膜异位症在我院行保守性手术+药物治疗6个月后，经足月分娩，现妊娠结束大于1年，有规律月经，无内异症复发的患者38例为治愈组；另选取30例同期健康育龄妇女为对照组。纳入标准：入组前3个月内未行激素治疗；月经规律；年龄25～45岁。排除标准：近期有生育要求；半年内有内异症相关治疗；有宫内节育器；半年内有哺乳病史；生殖道急性炎症；同时合并子宫腺肌病、子宫肌瘤、多囊卵巢综合征等内分泌相关疾病和自身免疫性疾病。内异症组年龄25～45岁，平均(31.18±0.89)岁；术中诊断为单侧卵巢子宫内膜异位囊肿26例，双侧14例；合并盆腔腹膜内异症28例，合并骶韧带内异症10例；rAFS评分Ⅲ期11例，Ⅳ期29例；增生期27例，分泌期13例。治愈组年龄27～40岁，平均(32.00±0.63)岁；术中诊断为单侧卵巢子宫内膜异位囊肿29例，双侧9例；合并盆腔腹膜内异症20例，合并骶韧带内异症7例；rAFS评分Ⅲ期18例，Ⅳ期20例；增生期26例，分泌期12例。对照组年龄25～42岁，平均(31.00±0.83)岁；增生期19例，分泌期11例。三组受试者的年龄、子宫内膜期别等资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核批准且入选者均已签署知情同意书。

1.2 子宫内膜的采集 内膜采集使用一次性宫腔组织吸引管吸取子宫内膜组织，固定保存，石蜡包埋。

1.3 检测方法 内膜组织先行常规病理检查，排除其他妇科疾病，再进行实验。

1.4 MMP-9和VEGF的免疫组化检测结果判定 应用双目显微镜观察所有染色切片，采用双盲法。MMP-9及VEGF蛋白均定位于细胞浆中。光镜分析综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行评价：不显色或显色不清为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分；阳性细胞数＜5%为1分，5%～25%为2分，26%～50%为3分，＞50%为4分。两项之和≥4分为阳性表达，＜4分为阴性表达。

1.5 统计学方法 应用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，计数资料以百分率表示，均数的比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，若四格表中有理论频数1≤T≤5时，用校正公示计算χ2值。以P＜0.05为差异有统计学意义。相关性采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 在位内膜MMP-9及VEGF的表达 免疫组化检测的结果显示MMP-9阳性表达主要分布于子宫内膜腺上皮细胞胞浆(图1)，VEGF阳性表达主要分布于子宫内膜间质细胞、血管平滑肌细胞的胞浆(图2)。采用χ2检验，统计分析结果显示：内异症组在位内膜MMP-9和VEGF的表达较对照组和治愈组均明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而治愈组MMP-9和VEGF的表达与对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

图1 三组受试者MMP-9免疫组化染色结果

图2 三组VEGF免疫组化染色结果

表1 三组受试者在位内膜MMP-9和VEGF表达情况

2.2 MMP-9与VEGF在内异症患者治疗前后及治愈后在位内膜表达的相关性 对在位内膜MMP-9和VEGF进行Spearman相关分析，结果显示：(1)内异症组MMP-9和VEGF存在正相关关系(r= 0.805，P＜0.05)；(2)治愈组在位内膜MMP-9和VEGF存在正相关关系(r=0.870，P＜0.05)。

3 讨论

内异症的发病率可高达10%～15%，且呈上升趋势。其临床表现多种多样，盆腔痛和不孕是主要的症状[1-2]，严重影响育龄妇女的身心健康及生育能力。内异症的病因和发病机制至今仍未明确。因越来越多的研究发现子宫在位内膜与正常子宫内膜不一样的特质，有学者提出“在位内膜决定论”[3-4]。本研究从在位内膜入手，检测治疗前内异症的患者和治愈后患者在位内膜的基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。

本研究结果：内异症患者在位子宫内膜的MMP-9阳性表达率均明显高于治愈组和对照组；治愈组与对照组比较差异无统计学意义。盆腔内异症患者在位内膜MMP-9的活性增加，对局部组织结构及基底膜成分的破坏能力增加，利于逆流入腹腔的内膜组织对腹膜侵袭，促进内异症的发生。治愈组的MMP-9表达较内异症组显著下降。盆腔内异症患者手术中完全切除异位病灶，术后辅助药物治疗，治疗促使炎症细胞因子分泌减少[5]，炎症消退，激素调节增强，降调MMP-9表达。

本研究结果：内异症患者在位子宫内膜VEGF蛋白阳性表达率均高于治愈组和对照组；治愈组与对照组比较无统计学差异。此研究结果与多个报道一致，表明内异症患者的在位内膜具有异位种植生长的内在条件[6]。内异症组VEGF蛋白表达增多，引起毛细血管通透性增加，血浆外渗，使游离内膜能够获得更多的营养，细胞增殖加快，建立新的血管，形成新的异位病灶[7]。治愈组在位内膜的血管生成活性得到抑制。子宫内膜的血管生成能力直接影响病灶的形成[8]，是内异症发生、发展的关键步骤，也是一个潜在的干预治疗的新靶点。现已经有几种抗血管药物的实验显示抑制血管生成可使病灶萎缩。此发现有望成为内异症治疗方法的一种新选择[9]。

进一步的Spearman相关性分析结果显示：随着内异症在位子宫内膜MMP-9蛋白阳性表达率的降低，其VEGF蛋白阳性表达率亦降低。MMP-9和VEGF表达呈正相关。VEGF可促进MMP-9的合成，并提高MMP-9的活性和表达，调节MMP-9的转录水平。MMP-9亦通过和整合素的相互作用而加强细胞间的粘附，促进血管内皮细胞的出芽，参与新生血管的形成[5]，从而促进子宫内膜细胞的异位粘附、种植和生长[10]。MMP-9和VEGF在盆腔内异症病灶形成中具有协同作用，促进其发生和发展，并可为内异症的治疗和预防复发提供指导。然而由于本研究的样本量偏小，需更大样本量的全面设计和深入研究。

综上所述，内异症患者的在位内膜的MMP-9和VEGF表达异常，较治愈组和对照组有明显的差异，在手术和药物治疗后，MMP-9和VEGF表达恢复正常，手术彻底地切除内异症病灶联合药物治疗可以改善内异症患者盆腔的微环境，延缓内异症病灶的再次产生，延迟复发。展望未来，希望能从在位内膜MMP-9和VEGF的角度研究更多的新型试剂盒来检测内异症的发生，研究更多的药物来延缓内异症的复发。

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Expression of matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor in eutopic endometrium of patients with endometriosis.

HUANG Li-xia,MA Li-guo,CAI Ru-yu,YANG Yi.Department of Gynaecology,Shenzhen People's Hospital,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

Objective To study the change of eutopic endometrium in patients with endometriosis,in order to confirm the clinical efficacy of treatment.MethodsForty patients diagnosed as endometriosis by laparoscopy and pathology from November 2013 to May 2014 in the Department of Gynaecology in our hospital were enrolled as endometriosis group.Thirty-eight patients of endometriosis cured in our hospital without recurrence after treatment were selected as cured group.Thirty healthy women were selected as control group.The expression levels of matrix metalloproteinase 9(MMP-9)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in the three groups were detected and compared.ResultsMMP-9 and VEGF expression in endometriosis group were significantly higher than cured group and control group(P＜0.05),with no statistically significant difference between cured group and control group(P＞0.05). The expressions of MMP-9 and VEGF were positively correlated(r=0.805,P＜0.05).ConclusionMMP-9 and VEGF of eutopic endometrium in patients with endometriosis are expressed abnormally,which promote endometriotic lesions. Complete surgical excision of endometriotic lesions combined with drug treatment can postpone recurrence.

Endometriosis;Eutopic endometrium;Matrix metalloproteinase 9(MMP-9);Vascular endothelial growth factor(VEGF)

R711.71

A

1003—6350（2015）23—3478—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.23.1260

2015-05-24)

广东省深圳市科技创新委员会重大项目(编号：JCYJ20130402092657780)

马利国。E-mail：sunglowhlx@126.com