路妍妍，金海燕，田 耕

（广州医科大学附属第二医院妇产科，广东 广州 510260）

自然流产患者蜕膜组织中CXCR4的表达及意义

路妍妍，金海燕，田 耕

（广州医科大学附属第二医院妇产科，广东 广州 510260）

目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)在自然流产患者蜕膜组织中的表达情况及其临床意义。方法收集人正常妊娠(对照组)和自然流产蜕膜组织(自然流产组)各20例，采用免疫组织化学法检测CXCR4的表达。结果自然流产组CXCR4的表达显著高于正常对照组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。结论自然流产患者蜕膜组织CXCR4表达增高，可能通过募集NK细胞引起免疫排斥而导致流产。

自然流产；蜕膜；趋化因子受体4

自然流产(Spontaneous abortion，SA)是常见的妊娠并发症，危害妇女的身心健康。人类的妊娠有赖于绒毛外细胞滋养细胞侵蚀子宫内膜将胚胎植入宫腔内，再侵入血管内皮从而使血管重建，满足胎盘的血流供应。新近研究发现，趋化因子受体4(Chemokine receptor 4，CXCR4)参与血管重建过程，而血管重建障碍会导致病理妊娠[1]。目前未见自然流产的蜕膜中CXCR4的研究报道，本实验通过免疫组化检测蜕膜CXCR4的表达，探索自然流产发生机制，为今后自然流产的诊治提供基础性研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年6月至2011年6月在广州医科大学附属第二医院门诊诊断自然流产的患者20例纳入自然流产组，并选同期在我院进行正常人工流产的患者20例作为对照组。两组患者年龄均在20～35岁，身体健康，月经规律(月经周期28～30 d)，通过妇检排除阴道炎、宫颈糜烂和宫颈息肉等其他妊娠合并症，3个月内未服用药物，未放置宫内节育器。

1.2 取材 吸宫术后迅速取蜕膜组织1 cm×1 cm×1 cm，10%中性甲醛水溶液内固定24 h后脱水、包埋，制成蜡块。

1.3 试剂与方法 鼠抗人CXCR4单克隆抗体购自Invitrogen试剂公司，免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。采用免疫组织化学SP法测定CXCR4在组织中的表达情况，方法参照试剂盒说明书。常规将切片脱蜡至水，室温下3%H2O2作用和正常羊血清工作液封闭各10 min；滴加鼠抗CXCR4单克隆抗体(1：50)，4℃孵育过夜；二抗工作液(生物素化羊抗小鼠IgG)室温10 min；链酶素抗生物素—过氧化物酶溶液作用室温10 min；二氨基联苯胺显色；脱水、透明、封片。用已知阳性组织切片作阳性对照，阴性对照以磷酸盐缓冲液(PBS)取代CXCR4抗体。

1.4 结果判定 免疫阳性染色以细胞内呈现棕黄色颗粒为准。应用申洪等(2)提出的阳性单位(Positive unit，PU)概念定量表达免疫组化阳性反应程度，使用Leica QW550图像分析系统，在10×20倍镜下每个样本随机选择10个阳性视场作为测试点，测定蜕膜基质细胞和背景区域的平均灰度，分别为的为Gα和GB，Gmax＝256，为检测仪的最大灰度。按公式PU=[(Gα-GB)/Gmax]×100计算。

1.5 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行实验数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

两组蜕膜CXCR4的表达主要分布在蜕膜基质细胞的胞浆和胞核内(见图1和图2)。对照组CXCR4PU值为(2.30±0.55)，自然流产组为(5.37±0.87)，组间比较差异具有显著统计学意义(t值=13.35，P=0.00＜0.01)。

图1 SA组蜕膜CXCR4的表达(200×)

图2 正常妊娠组蜕膜CXCR4的表达(200×)

3 讨论

蜕膜淋巴细胞和基质、滋养细胞均表达多种趋化因子及受体。趋化因子是一组相对分子质量为8 000～12 000、至少存在2个保守的半胱氨酸的、含70～90个氨基酸的分泌型单链蛋白质，能够趋化细胞定向移动，通过趋化因子受体介导其功能。CXCR4是一个高度保守的G蛋白偶联受体，编码352个氨基酸[3]。CXCLl2/CXCR4是一对独特的趋化因子受体-配体，它们之间广泛地表达于多种细胞和组织，包括免疫细胞、心脏、脑、肝等，在免疫、微循环及中枢神经系统的发育中起着非常重要的作用，还参与新生血管形成、造血生成、肿瘤侵袭转移等过程[4]。

有研究显示早孕蜕膜NK细胞表面除CXCR3和CXCR4高表达外，其他趋化因子受体都呈低表达，可能趋化NK细胞在局部聚集调节母胎界面免疫平衡[5-6]。我们的研究发现蜕膜基质细胞表达CXCR4，同Ren等[7]的研究一致。Ren等[7]发现CXCL12/ CXCR4信号通路参与调节人早孕期滋养细胞和蜕膜基质细胞的增殖与侵袭。侵蚀性滋养细胞可表达CXCR4且表达持续到取代蜕膜血管内皮细胞后。CXCR4通过调节VEGF参与血管重建过程，而血管重建障碍会导致病理妊娠。

自然流产的发生率约占全部妊娠的15%～20%，是产科常见病理性妊娠。自然流产病因复杂，目前仍约有40%原因不明。自然流产蜕膜中细胞因子表达增高。多种趋化因子在蜕膜中表达，起着趋化免疫活性细胞的作用。本实验观察到自然流产组CXCR4表达增高。蜕膜中最重要的免疫细胞是CD56+CD16-NK细胞。NK细胞在蜕膜中以表达CXCR4等趋化因子受体为主。蜕膜表达趋化因子CXCR4可能招募NK细胞到母胎界面调节免疫反应[8]。有研究显示NK抑制滋养细胞的侵入迁移，在复发性流产患者中滋养细胞侵袭力和迁移力低下[9]。自然流产中CXCR4表达增高，可能募集NK细胞，调节母胎界面的免疫排斥反应，从而导致流产。

综上所述，早孕蜕膜组织中表达CXCR4，调节滋养细胞侵蚀。自然流产中CXCR4表达增高，可能通过调控母一胎界面NK细胞的聚集，影响早孕期免疫微环境变化，抑制滋养细胞的侵入迁移，从而引起流产。

[1]Barrientos G,Tirado-González I,Freitag N,et al.CXCR4(+)dendritic cells promote angiogenesis during embryo implantation in mice[J].Angiogenesis,2013,16(2):417-427.

[2]申 洪.免疫组织化学染色定量方法研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志,1995,4(1):89-92.

[3]De Clercq E.Potential clinical applications of the CXCR4 antagonist bieyclamAMD3100[J].Mini Rev Med Chem,2005,5(9):805-824.

[4]Nagamatsu T,Fujii T,Ishikawa T,et al.A primary cell culture system for human cytotrophoblasts of proximal cytotrophoblast cell columns enabling in vitro acquisition of the extra-villous phenotype [J].Placenta,2004,25(2-3):153-165.

[5]Hanna J,Wald O,Goldman-Wohl D,et al.CXCL12 expression by invasive trophoblasts induces the specific migration of CD16-human natural killer cells[J].Blood,2003,102(5):1569-1577.

[6]Red-Horse K,Drake PM,Gunn MD,et al.Chemokine ligand and receptor expression in the pregnant uterus:reciprocal patterns in complementary cell subsets suggest functional roles[J].Am J Pathol, 2001,159(6):2199-2213.

[7]Ren L,liu YQ,Zhou WH,et al.Trophoblast-derived chemokine CXCL12 promotes CXCR4 expression and invasion of human first-trimester decidual stromal cells[J].Hum Reprod,2012,27(2):366-374.

[8]Bai XX1,Kong BH,Zhang YZ,et al.Expression and significance of chemokine CXC receptor 3,4 and their ligands at the early pregnancy deciduaand villi[J].Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi,2008,43 (12):904-908.

[9]Sotnikova N,Voronin D,Antsiferova Y,et al.Interaction of decidual CD56+NK with trophoblast cells during normal pregnancy and recurrent spontaneous abortion at early term of gestation[J].Scand J Immunol,2014,80(3):198-208.

Expression and significance of CXCR4 in decidua of patients with spontaneous abortion.

LU Yan-yan,JIN Hai-yan,TIAN Geng.
Department of Gynecology and Obstetrics,the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the expression of chemokine receptor 4(CXCR4)and its clinical significance in decidua of patients with spontaneous abortion.MethodsThe expression of CXCR4 protein in decidua tissue of 20 patients with spontaneous abortion(spontaneous abortion group)and 20 healthy pregnant women(control group)were detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of CXCR4 in spontaneous abortion group was significantly higher than that in the control group(P＜0.01).ConclusionThe increased expression of CXCR4 in decidua tissue of patients with spontaneous abortion may cause immune rejection by the recruitment of NK cells and lead to abortion.

Spontaneous abortion;Decidua;Chemokine receptor 4

R714.21

A

1003—6350（2015）13—1892—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0682

2014-11-28)

广州医学院校基金资助项目(编号：2010C44)

路妍妍。E-mail：yanlup2006@163.com