黄经春 孙立魁 孙晓霞 范春光 孙永超 济南市卫生学校；国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心，山东省生物学评价重点实验室 （济南 250101）

1.研究背景及意义

毒理学安全性评价中减少动物使用已成为 趋势[1]，新型生物材料重组人皮肤表皮的出现为皮肤刺激试验体外替代方法提供了载体[2]，ISO/TC194 医疗器械生物学评价技委会已准备开展将重组人皮肤表皮应用到医疗器械检验的验证[3]。新型生物材料代替实验动物应用到医疗器械检验，能够充分体现替代、减少、优化的“3R”原则，在保护实验动物方面能够发挥非常重要的作用。现应用重组人皮肤表皮模型EpiDerm™和家兔分别进行医疗器械皮肤刺激试验,比较两种方法结果的一致性。

2.材料与方法

2.1 重组人皮肤表皮皮肤刺激试验

2.1.1 试验原理

对皮肤刺激阳性对照1%十二烷基硫酸钠(SDS)、阴性对照生理盐水、棉籽油及受试物（某医用敷贴按面积6:1 比例制备的浸提液[4]）分别作用于重组人皮肤表皮，接触一定时间后用MTT 法测试细胞相对活性，如果细胞的相对活性≤50%，认为受试物具有刺激性[5]。

图1. EpiDerm ™试剂盒

图2. 镜下观察组织病理

图3. 重组人皮肤表皮皮肤刺激试验结果统计

2.1.2 表皮模型

EpiDerm™试剂盒每盒包含有24 个表皮亚单位（见图1）

2.1.3 试验方法

（1） 将液体受试物100μL 直接滴在表皮表面，在37˚C5%CO2孵箱中孵育15min 之后，每块表皮至少用10mLPBS 清洗一次，然后再孵育18h，让受试物与组织充分作用。

（2） 将表皮与MTT 溶液在37˚C5%CO2孵箱中孵育3h，避光放置，分离表皮和胶原基质，在室温中置于2mL 酸性异丙醇24h。……