廖志伟 庄雅靖 余宏伟 喻 芳 刘孟忠 周同冲

1.广州医科大学附属肿瘤医院放疗科，广东广州 510095；2.中山大学肿瘤防治中心放疗科，广东广州 510060

泛素特异性肽酶22（ubiquitin-specific processing peptidase 22， USP22）属于去泛素化酶蛋白酶超家族，具有去泛素化的作用。USP22 编码产物在人类各种正常组织中呈现低丰度表达，在许多恶性肿瘤细胞中呈高丰度表达[1]。由于其在实体瘤中的特异性分布，可以作为肿瘤治疗的新靶点。

RNA 干扰（RNA interference，RNAi）技术作为一种干预基因表达的实验工具已广泛用于抗肿瘤的研究。 慢病毒载体介导的基因表达或RNAi 作用持续且稳定，其作为新一代高效表达载体推进了肿瘤的基因治疗研究。 本研究将CNE-2 细胞， 转染对照质粒的CNE-2 稳定细胞株， 转染sh-USP22 质粒的CNE-2稳定细胞株，于动物背部行皮下注射，观察其对裸鼠移植瘤成瘤的影响， 旨在研究USP22 沉默后的体内抗肿瘤效应。

1 材料与方法

1.1 材料

细胞：正常CNE-2 细胞，购自中南大学湘雅中心实验室， 培养及保存在广州永诺生物科技有限公司。本实验室前期研究以pLL3.7 质粒为载体，USP22 shRNA 序列靶点引自本课题组前期实验靶序列[2-3]，针对USP22 的编码序列设计的干扰序列如下：

sh-USP22 组：5'-AACTCACGGACAGTCTCAACAATTTCAAGAGAATTGTTGAGACTGTCCGTGTTTTTTC-3'； 3'-TTGAGTGCCTGTCAGAGTTGTTAAAGTTCTCTTAACAACTCTGACAGGCACAAAAAAGAGCT-5'。 阴性对照组：5'-AACTTTCTCCGAACGTGTCACGTTTCAAGAGAACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTTC-3'； 3'-TTGAAAGAGGCTTGCACAGTGCAAAGTTCTCTTGCACTGTGCAAGCCTCTTAAAAAAGAGCT-5'。

正常CNE-2（阴性对照），CNE-2 空载体细胞（Scrambled），USP22 表达下调稳定细胞株（sh-USP22），3 种细胞用含10%胎牛血清（GIBCO）的RPMI 1640 培养液（GIBCO）培养于CO2体积分数为5%的37℃的培养箱中。

实验动物：6 周龄、雌性、SPF 级BALB/c 裸鼠9 只，购于中山大学实验动物中心。 动物合格证编号：No.44008500006768，饲养于中山大学实验动物中心。 在无特殊病原条件（SPF）下饲养，饲料及水均自由摄入且经过严格的灭菌处理。……