基于NP基因的新城疫病毒Class I实时荧光定量RTPCR方法的建立及验证
2015-03-26曹军平王晓泉刘晓文刘秀梵
曹军平, 王晓泉, 程 汉, 刘晓文, 刘秀梵
(1.扬州大学兽医学院,江苏 扬州 225009;2.江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300)
新城疫(Newcastle disease,ND)是唯一分布于五大洲的OIE A类传染病。中国ND疫情十分严重,是养鸡业发展最直接的威胁[1],已给家禽生产造成严重损失[2]。
新城疫病毒(NDV)是新城疫的病原,属禽副粘病毒1型(AMPV-1),有囊膜,基因组为单股负链RNA,大小约15 kb,编码6种蛋白质,包括RNA聚合酶(L)、血凝素-神经氨酸酶蛋白质(HN)、融合蛋白质(F)、基质蛋白质(M)、磷蛋白质(P)和核蛋白质(N)。新城疫病毒分离株根据对鸡致病严重程度可分为3个主要致病型(毒力型)[2]:Lentogenic株是低致病力型,可造成鸡轻微呼吸道或肠道感染;Mesogenic株是中等致病力型,主要引起呼吸系统疾病;Velogenic株是高致病力型,造成高死亡率,基于病理表现被进一步分为嗜神经或嗜内脏型。高毒力型NDV属于必须报告的OIE A类传染病,它的发生可导致检疫和贸易禁运。
NDV只有1个血清型,但根据亲缘关系可以划分为两大类:Class I、Class II,绝大多数常见的都是Class II,可分成Ⅰ~Ⅹ10个基因型。Class I于2006年被证实存在,当前可被细分为9个基因型(1~9)。Class I所有自然分离株均为无毒株或弱毒株,但有经人工传代返强的报道,由于其分布广泛,数量庞大,对养禽业有巨大的潜在威胁[3]。为了更好地了解Class I新城疫毒株的生物学特性,为研究Class I提供参考,建立一种快速特异的检测方法很有必要。
目前,用鸡胚进行病毒分离,然后用新城疫特异性抗体做血凝抑制试验代表病毒检测的参考标准[4]。虽然病毒分离是一个敏感和特异性的方法,但由于NDV毒力差异大,低毒和无毒株普遍存在,加之弱毒疫苗的普遍使用,对分离毒株血凝抑制试验结果必须结合毒力鉴定才能确诊,一般需要数天才能完成[1]。……
