史亚军 王 卉 邓 辉 许 静 张小飞

陕西中医学院药学院(咸阳 712046)

·方药纵横·

丹参总酚酸提取物磷脂复合物制备工艺研究*

史亚军 王 卉 邓 辉 许 静 张小飞

陕西中医学院药学院(咸阳 712046)

目的：考察丹参总酚酸提取物与大豆卵磷脂形成磷脂复合物的最佳制备工艺。方法： 以丹参总酚酸提取物与磷脂结合百分率为评价指标，采用单因素考察和正交设计试验系统研究了复合溶剂类型、药物与磷脂比例、提取物的浓度、复合反应时间、复合时的温度等因素对磷脂复合物形成的影响。结果：确定了以甲醇作为反应溶剂，丹参总酚酸与大豆卵磷脂比例为1∶2，丹参总酚酸投料浓度为3mg/mL，在60℃条件下复合1h为较佳条件。结论：复合物的形成受反应溶剂、反应物浓度和温度的影响较大；优选的工艺可以作为丹参总酚酸提取物磷脂复合物的制备。

丹参[1]为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎，是临床上较为常用的活血化瘀类中药，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。丹参的主要有效成分为水溶性成分丹参总酚酸类,现代研究表明，丹参总酚酸对于组织缺血再灌注损伤有着显著地保护作用[2-3]。临床研究提示，丹参对中风有着明显的治疗作用[4]。丹参总酚酸提取物虽然水溶性良好，但其脂溶性较差，导致生物利用度较低，影响了其临床疗效的充分发挥。磷脂复合物是近年来出现的一种改性技术，已被广泛应用于中药、天然药物有效成分的改性，该技术能明显改善药物的脂溶性而提升生物利用度，进一步拓展药物的临床用途[5]。本文通过系统研究，将丹参总酚酸提取物制成磷脂复合物，为拓展其制剂学用途奠定基础。

1 仪器与试药 HJ-4B多头磁力加热搅拌器；AR1140型电子天平；RE-3000旋转蒸发器；布氏漏斗抽滤装置；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵。丹参总酚酸提取物(自制)，大豆卵磷脂大豆卵磷脂(1003E03，PC77.9%，上海爱康精细化工有限公司)，四氢呋喃、甲醇、无水乙醇、氯仿等均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 丹参总酚酸提取物制备工艺 取丹参，切成小段，加水于80℃提取两次，合并提取液，滤过，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，静置12h，取上清液，减压回收乙醇，浓缩干燥，即得[6]。

2.2 制备方法及工艺评价 磷脂复合物的形成是将被改性药物与磷脂按一定比例在非质子传递类有机溶剂中(常采用无水乙醇、四氢呋喃、甲醇等)，通过一定的复合反应条件干预(如加热、搅拌)，使其二者发生结合而形成磷脂复合物(介于物理结合与化学结合的中间态结合)，再于减压低温条件下除去反应溶剂或采用非溶剂沉淀法分离而获得干燥固体磷脂复合物[7]。

磷脂复合物的复合效果通常采用复合率进行评价，即利用被复合的药物在氯仿中难溶，而形成的磷脂复合物在氯仿中易于溶解，向形成的磷脂复合物(精密称定)中加入适量的氯仿，室温下搅拌使其溶解，置于布氏漏斗中抽滤(滤纸预先干燥并精密称重)，将滤纸与沉淀物干燥至恒重，精密称量。药物的反应投料量与沉淀量(减去滤纸重量)的差值即为药物和磷脂发生复合的药物量，计算药物与磷脂的复合百分率，复合率的计算公式为：复合率(%)=(W1-W2)/W1×100%(W1为被复合药物初始投入量，W2为沉淀量)

2.3 单因素实验 根据复合反应发生过程，影响复合率的因素主要包括复合溶剂类型、复合反应时间、复合时体系的温度、药物浓度、投料比等，采用单因素试验对上述各因素进行筛选，确定主要影响因素。

2.3.1 反应溶剂的考察:取丹参总酚酸1g，大豆卵磷脂3g，反应温度为55℃，反应时间为1h，丹参总酚酸提取物的浓度为3mg/mL，对反应溶剂进行优选，结果表明，四氢呋喃和无水乙醇的复合率分别为74.36%和66.02%，而甲醇的复合率为92.52%，因此选择以甲醇为复合溶剂。

2.3.2 药物与磷脂比例的考察:以甲醇为反应溶剂，其余条件同上，测定丹参总酚酸提取物和磷脂质量比为1∶1，1∶2，1∶4时的复合率，结果提示二者的投料比对复合率有一定的影响，磷脂比例越高，复合率越高，但超过2∶1时，复合率变化较小。

2.3.3 丹参总酚酸提取物浓度的考察:以甲醇为复合溶剂，药物和磷脂的投料设定为1∶3进行复合，其余反应条件同上，设定反应体系中丹参总酚酸提取物的浓度为3、6、9mg/mL，复合率分别为94.08%、81.03%和62.21%，提示随着体系中丹参总酚酸提取物浓度的增加，复合率呈下降趋势。

2.3.4 复合时的温度和复合时间的考察:复合条件同上，结合磷脂的热稳定性，确定考察反应温度为40、50、60℃，反应时间分别考察0.5、1、2、3h，测定复合率，结果表明，温度对复合率有较大的影响，温度越高复合率越大，60℃时复合率达92.86%。反应时间结果提示，复合反应时间在0.5～3h内影响较小。

表1 正交试验因素与水平表

2.4 正交设计试验 单因素试验结果表明，反应溶剂对复合有着显著影响，根据实验结果选择甲醇作为复合溶剂，其余几个因素均有一定程度的影响，采用正交试验对投料比例(w/w，A)、丹参总酚酸浓度(mg/mL， B)、反应温度(℃，C)、复合时间(h，D)进行优化，根据单因素试验结果，设计正交表设计见表1，试验结果和方差分析结果分别见表2、3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析表

注： F1-0.50(2，2)=19.00，F1-0.10(2，2)=99.0

正交分析表明，B、C因素的影响均有显著性，结合直观分析，参考单因素实验结果，确定丹参总酚酸与大豆卵磷脂的投料比为为1∶2(w/w)、丹参总酚酸提取物的浓度确定为3mg/mL,于60℃条件下反应1h。

2.5 验证试验 对上述正交试验优化的最佳工艺条件进行验证，按照上述条件进行3次复合反应，测定复合率，结果见表4，结果提示，优选的工艺具有较高而稳定的复合率，表明确定的最佳复合工艺稳定可行。

表4 工艺的验证试验

3 讨 论 大豆卵磷脂对温度较为敏感，高于70℃条件下，磷脂独极易氧化，因此反应温度设定在70℃以下。大豆卵磷脂极易吸湿，因此，干燥完全后应及时密封保存以降低吸湿率。反应溶剂的选择，文献中多采用四氢呋喃，考虑到溶剂的毒性和复合率，但本研究表明，四氢呋喃复合率较低，且毒性较强，在实验中，可明显观察到丹参提取物在其中溶解度较低，而磷脂复合物形成的本质是磷脂和药物的分子状态下的一种弱结合，不能完全溶解会直接导致提取物中药物分子与磷脂分子的结合，导致复合率低，而以甲醇为溶剂复合效果良好。

磷脂复合物能显著地改善药物的脂溶性，改善药物的油水分配系数，特别是适用于脂溶性较差药物原料的改性，显著提高药物生物利用度，同时，磷脂作为一种机体内源性物质，可有效增加药物的顺应性，减少药物不良反应。结果表明，该技术能明显改善其生物利用度[8]，目前尚没有对丹参总酚酸进行磷脂复合物改性的研究，而有效部位作为中药制剂投料的特有形式，对提取物脂溶性的改善，可有效提高丹参有效成分血管外给药的生物利用度，为高效新制剂的研制奠定了物质基础。

[1] 赵 娜，郭治昕，赵 雪，等.丹参的化学成分与药理作用[J].国外医药植物药分册，2007，22(4)：155-160.

[2] 陈 雯，郜凤香，郭丽丽，等.丹参总酚酸对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制研究[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(12)：242-245.

[3] 张铁华，杨 涛，张永利，等.丹参注射液对兔视网膜缺血再灌注损伤后保护作用[J].陕西中医，2013,34(2)：241-242.

[4] 韩景献，韩 力.注射用丹参总酚酸治疗缺血性中风瘀血阻络证临床研究[J].天津中医药，2005，22(4):287-289.

[5] 史亚军，吴品江，许润春，等.黄芩苷磷脂复合物基本性质研究[J].中草药，2012，43(1)：78-82.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版[S].中国医药科技出版社，2010：373-374.

[7] 廉 洁，王伯初.药物磷脂复合物工艺评价标准及应用研究进展[J].生物技术通讯，2006,17(5)：830-833.

[8] 刘莎莎，李 文，李俊松，等.磷脂复合物改善丹参素口服生物利用度的而研究[J].南京中医药大学学报，2014,30(2)：164-167.

(收稿2014-12-11;修回2015-01-10)

Research on preparation of salvia total phenolic acids-phospholipid complex

Pharmacy Faculty, Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Shi Yajun Wang Hui Deng Hui et al

Objective: To study the optimum conditions for the formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipids.Method: With combined percentage as evaluation index，adopt single factor and orthogonal design test methods study the following factor: compound solvent type, drugs and phospholipid proportion, the concentration of the extract, reaction time and the temperature.Results: The optimized preparation conditions for Salvia total phenolic acids phytosomes were obtained as follows: Solvent was mathanol.The ratio of Salvia total phenolic acids to phospholipid was 1 to 2.Temperature was 60℃ .Reaction time was 1 h. Salvia total phenolic acids concentration was 3mg/mL. Conclusion: The formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipid is greatly influenced by the solvent, concentration and temperature; the optimized preparation is feasible and stable.

@Total salvianolic acids @Phospholipld complex Orthogonal test

*陕西省科技厅科技攻关计划项目(2013K12-07-03)

陕西中医学院创新基金项目(14XJZR01)

@丹参总酚酸 @磷脂复合物 正交试验

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.042

陕西省重点科技创新团队项目(2013KCT-26)