谢丽基，谢芝勋，黄　莉，谢志勤，邓显文，刘加波，罗思思，黄娇玲， 曾婷婷，张艳芳，王　盛

(广西壮族自治区兽医研究所 广西畜禽疫苗新技术重点实验室， 南宁 530001)

禽呼肠孤病毒蛋白质启动PI3K/Akt信号通路的分析

谢丽基，谢芝勋*，黄莉，谢志勤，邓显文，刘加波，罗思思，黄娇玲， 曾婷婷，张艳芳，王盛

(广西壮族自治区兽医研究所 广西畜禽疫苗新技术重点实验室， 南宁 530001)

旨在找出激活PI3K/Akt信号通路的禽呼肠孤病毒(ARV)蛋白质。选取ARV中潜在具有激活PI3K/Akt信号通路活性的σA、σNS、μA、μB和μNS蛋白作为研究对象，将这5个基因克隆到真核表达载体pcAGEN，成功构建重组质粒σA-pcAGEN、σNS-pcAGEN、μA-pcAGEN、μB-pcAGEN和μNS-pcAGEN。将构建的重组质粒转染Vero细胞，采用间接免疫荧光和Western blot检测目的蛋白质的表达，并通过流式细胞术和Western blot，检测转染后Vero细胞磷酸化Akt(P-Akt)的表达量。结果显示，5个目的蛋白质均得到表达。转染σA-pcAGEN或σNS-pcAGEN的Vero细胞，P-Akt的表达量明显升高，而使用PI3K特异性抑制剂LY294002则能抑制P-Akt的表达量明显升高。结果表明，ARV的σA蛋白和σNS蛋白能激活细胞的PI3K/Akt信号通路。

禽呼肠孤病毒；PI3K/Akt信号通路；蛋白质

真核细胞内存在多条信号转导通路，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在众多信号通路中发挥十分重要的作用，可通过其下游效应分子蛋白激酶B(Akt)来调控多种细胞功能，如细胞增殖与分化、抑制细胞凋亡等，病毒感染通常会干扰该信号通路。PI3K是由催化亚基p110和调节亚基p85所组成的二聚体蛋白，具有类脂激酶和蛋白激酶的双重活性[1]。研究表明，病毒蛋白质或细胞蛋白质通过PXXP(P为脯氨酸，X为任意氨基酸)或YXXXM/YXXM(Y为酪氨酸，X为任意氨基酸，M为蛋氨酸)基序与p85结合，从而激活PI3K/Akt信号通路，使磷酸化的Akt(P-Akt)表达量升高，实现抑制细胞凋亡的发生[2-7]。……