刘艳华，胡 亚，伍爱荣

（湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳421001）

大头艾纳香总黄酮含量测定及鉴别

刘艳华，胡 亚，伍爱荣

（湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳421001）

目的：探讨大头艾纳香提取物中总黄酮含量。方法：采用超声波从大头艾纳香中提取总黄酮类物质，对提取的黄酮类物质用分光光度法测定含量。结果：大头艾纳香中总黄酮含量平均值为3.1312%，加标回收率101.2%～96.76%之间，平均加标回收率达98.59%，精密度高（RSD=1.65%，n=5）。结论：该法操作简便、快速、数据可靠、精密度高，可用于大头艾纳香提取物中总黄酮含量的测定。

超声波提取；大头艾纳香； 总黄酮

1 仪器与试剂

1.1 仪器

KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；101-2型电热恒温鼓风干燥箱（上海南阳仪器有限公司）；T6新世纪紫外可见分光光度计（2004（C）北京普析通用仪器有限责任公司）； WFH-203三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；SHB-IV循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；800型台式离心机（上海浦东物理光学仪器厂）；电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

1.2 试剂

甲醇AR；乙醇AR；石油醚AR；橙皮苷标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜大头艾纳香植株采自广西桂林临桂县。

2 定性实验—总黄酮的鉴别

2.1 颜色反应

紫外光下成色反应：取本样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈现灰黄色，紫外光下呈现灰褐色并且有荧光斑点。

浓氨水反应：取本样品溶液点在滤纸上，并将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈现极明显黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取本样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈现灰黄色，紫外光下呈现黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取本样品溶液点在滤纸上，滴加1%浓度的乙酸镁甲醇溶液，吹干，在紫外光下呈黄色斑点。

本次论坛是在商务部贸易救济调查局指导下，由上海市商务委员会与上海社会科学院共同主办。上海市政协副主席周汉民到会并作主旨演讲；世贸组织副总干事易小准发表视频讲话，商务部贸易救济调查局局长余本林、上海市商务委副主任申卫华到会致辞。来自国内外的专家学者，行业组织、研究机构、企业以及长三角政府部门的代表近300人参加。

盐酸-镁粉反应：滴乙醇提取液1ml于试管中，加入镁粉，再加入浓盐酸数滴（一 次加入），有泡沫处呈紫红色。

2.2 纸层析

取本样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶水∶醋酸=4∶5∶1作为展开剂，上行展开5h，然后取出晾干。喷洒1%的氯化铝乙醇溶液。吹干后放于紫外光下，可以见到有荧光斑点。

3 用紫外分光度法进行测定大头艾纳香中总黄酮含量

3.1 制备样品溶液

将大头艾纳香枝叶粉碎并过40目筛，用1：10的石油醚进行回流脱脂两次，每次时间为2h，抽滤洗涤，再放入40℃的鼓风烘箱中干燥1h左右。称取1.0g已脱脂的大头艾纳香粉末，准确加入25mL甲醇，密塞，摇匀，称定质量。用超声波提取30min，取出放冷却，再称定其质量，用甲醇补足其减失的质量，摇匀，并离心分离，然后取上清液5mL，用甲醇定容至50mL，得样品液［1］。

3.2 对照品溶液的制备

准确称取橙皮苷标准品0.0050g，加甲醇溶解并将其定容至50mL，可得浓度为0.10mg/mL的芦丁标准溶液。

3.3 测定波长

分别取l.0mL样品溶液和l.0mL对照品溶液液于10mL容量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，在200～500nm进行扫描，发现均在280nm附近有最大吸收峰，实验中选择测定波长280nm。

3.4 绘制标准曲线

分别准确精密吸取橙皮苷对照液（0.10mg/mL）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mL于10.00mL容量瓶中，加甲醇定容，于280nm处测吸光度。吸光度测定结果分别为：0.00，0.127，0.246，0.370，0.564，0.764，0.925，根据以上数据得回归方程：A=2.72×10-2+18.102C，r=0.9979［2］。

3.5 精密度的测定

精密吸取0.1mg/mL橙皮苷对照品1.5mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至10mL刻度，在280nm处测定吸光度，平行制备5份，每份测定3次，RSD=0.26%，1-5号对照品号，吸光度分别为0.316，0.317，0.317，0.318，0.319，平均值为0.3172，表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性的测定

分别取对照品溶液和样品溶液1.0mL于10mL容量瓶中并加甲醇稀释至刻度，室温放置分别0，2，4，6，8，10，12，24h后，测定其吸光度（n=3），计算对照品及样品溶液总黄酮含量，对照品含量（%）分别为1.013，1.002，1.022，1.003，1.031，0.998，0.977，1.032，平均值为1.00975，样品溶液含量（%）分别为3.252，3.146，3.166，3.264，3.316，3.213，3.125，3.137，平均值为3.2024，对照品及样品溶液的RSD分别为1.84%，2.18%见表3，表明对照品及供试品溶液在24h内稳定。

3.7 重复性及含量的测定

取样品溶液1.0mL于10mL容量瓶中并加甲醇稀释至10mL刻度，平行制备5份于280nm处测定吸光度，样品1-5号，以标准曲线计算得到总黄酮的含量（%）分别为3.065，3.126，3.081，3.142，3.154，大头艾纳香中总黄酮含量平均值为3.1312%，RSD为1.2457%，表明重复性较好。

3.8 加标回收实验

分别精密量取已知总黄酮含量的提取溶液6份，每份中加入一定量的橙皮苷标准品，按上述操作方法测得吸光度，得出总黄酮含量，计算出加标回收率。样品1-6号，样品中总黄酮含量62.624（μg），加标量（μg）分别为100，100，100，50，50，50，实测值（μg）分别为160.434，162.274，163.824，111.004，111.959，111.359，回收率（%）分别为97.81%，99.65%，101.2%，96.76%，98.67%，97.47%，实验结果表明大头艾纳香中总黄酮含量平均值为3.1312%，加标回收率101.2%-96.76%之间，平均值98.59%，精密度高（RSD=1.65%）。

4 讨论

结果表明大头艾纳香中总黄酮含量平均值为3.1312%，加标回收率101.2%～96.76%之间，平均加标回收率达98.59%，精密度高（RSD=1.65%，n=5）。方法操作简便、实用、快速、数据可靠、精密度高，结果表明，大头艾纳香中含有较为丰富的黄酮，具有开发和利用价值。

［1］杨荣平，寿清耀，王宾豪等.紫外分光光度法测定复方补骨质缓释片中补骨脂总黄酮的含量［J］.中国药房，2007（9）：673-674.

［2］姜国芳，谢宗波，乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展［J］.时珍国医国药，2004（5）：306.

Determination of flavonoids content and identify bulk einar ointment

LIU Yan-hua，HU Ya，WU Ai-rong
（Institute of Hunan environmental biological technology，Hengyang Hunan 421001）

Objective： explore the content of total flavonoids in the extract of Blumea megacephala. Methods：Using ultrasonic extraction method of total flavonoids extraction from Blumea megacephala，on the extraction of flavonoids content was determined by spectrophotometry.Results：show that total flavonoids content in Blumea megacephala average value is 3.1312%，the recovery rate of 101.2%-96.76%，the average recovery was 98.59%，high precision（RSD=1.65%，n=5）.Conclusion：The method is simple，rapid，reliable data，high precision，and can be used for determination of total flavonoids in Blumea megacephala extract.

Ultrasonic wave treatment；Blumea megacephala Chang et Tseng；Totalflavanone

G512.74

A

10.3969/j.issn.1672-7304.2015.04.046

1672-7304（2015）04-0096-02

衡阳市科技局基础研究计划项目：NO：2012KJ36（衡科发［2012］75号）；湖南省教育厅高校科研项目：NO：12C1059（湘教通［2012］596号）。

（责任编辑：廖建勇）

刘艳华（1970-），女，湖南衡阳人，副教授，研究方向：生物学教学、天然产物。