刘超 景赞

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

饲料中黄曲霉毒素B1的检测

刘超 景赞

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

采用高效液相色谱串联质谱法对饲料中黄曲霉毒素B1进行检测。建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以0.1%甲酸水、乙腈（0.1%甲酸）为流动相，质谱使用电喷雾离子源，正离子扫描，以313.0/285.0为定量离子对的LC-MS/MS检测方法。结果表明：该方法所测得的黄曲霉毒素B1在0～100.0ng/mL内具有良好线性，检出限为2.8μg/kg，加标回收率在93.3%～98.3%。该方法适合饲料中黄曲霉毒素B1的分析检测。与传统的薄层色谱、高效液相色谱法相比较，该方法具有分析速度快、操作方便、重现性好、灵敏度高等特点。

饲料；黄曲霉毒素B1；液质联用

黄曲霉毒素B1（AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，是已知的化学物质中致癌性最强的一种。AFB1污染的物质包括食品中的花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等农产品及其加工产品；且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。黄曲霉毒素无臭、无味、无色，在饲料中及其稳定，对家禽、家畜的健康威胁极大，作为饲料强制性卫生监控指标，目前有半定量薄层色谱法[1]、免疫亲和柱净化——高效液相色谱法[2]、免疫亲和荧光光度法[3]、酶联免疫吸附法[4]。高效液相色谱法虽然灵敏度高，但是样品前处理繁琐，操作复杂；薄层色谱法虽然简便，但是灵敏度差，因此研究能够准确、快速检测饲料中AFB1的检测方法是十分必要且具有现实意义的。

1 实验部分

1.1 材料与试剂

甲酸，优级纯；

乙腈，色谱纯；

超纯水；

AFB1标准品（2μg/mL，农业部环境保护科研所）。

1.2 仪器与设备

液相色谱-串联质谱仪，DGU-20A-API3200；

分析天平（精确度0.01mg，）德国赛多利斯集团，CP225D；

自动旋涡混合器，天津药典标准仪器厂，ZH-2；

水浴恒温振荡器，常州冠军仪器制造有限公司，SHA-B。

1.3 AFB1标准溶液的制备

根据需要将AFB1用50%甲醇水稀释成浓度为0、10、20、40、80、100ng/mL的标准溶液，备用。

1.4 试样的提取

准确称取研碎混匀的试样5.00g，置于100mL具塞三角瓶中，加入25mL50%甲醇水，置于自动涡旋混合器中涡旋1min，水浴恒温振荡器中振荡10min，于4000r/min离心5min，吸取10mL上清液于50mL分液漏斗中，加入10mL三氯甲烷，加盖轻轻振摇3min，静置分层，弃去三氯甲烷层，再加入10mL三氯甲烷重复上述步骤，过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。

1.5 色谱条件

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3，4.6×150mm，5μm；

进样体积：10μL；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

流动相：A-0.1%甲酸水B-0.1%甲酸乙腈，梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱Table 1Mobile phase condition

1.5.2 质谱条件

离子源，电喷雾离子源；扫描方式，正离子扫描；检测方式，多反应监测MRM；雾化气、气帘气、辅助加热器、碰撞气均为高纯氮气；IS：5000V；GS1：30Psi；CUR：10Psi；GS2：40Psi；TEM：450℃；CAD：3mL/min。

表2 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压Table 2Qualitative ion pair,quantitative ion pair,collision gas energy,cluster voltage

2 结果讨论

2.1 液相色谱柱的选择

Inertsil ODS-3代表了当今世界上新一代C18反相填料，从硅脱离危险原料的选择到键合工艺及最终包谱柱的装填，各着工序都经过严格的考察、设计。Inertsil ODS-3色谱柱主要特点：高纯度球形硅胶，高度统一的粒径分布，高超的化学键合技术，端基封尾处理技术，因此本试验中使用Inertsil ODS-3（4.6×150mm，5μm）作为分析柱。并取得良好效果。

2.2 流动相的选择

本文考察了GB/T30955-2014[2]中流动相为甲醇+水（45+55），和0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈作为流动相，从峰型、峰宽、灵敏度等方面考虑，最终选择0.1%甲酸水（A）、0.1%甲酸乙腈（B）做为本试验的流动相。可能的原因是AFB1在正离子模式下扫描，而甲酸在正离子模式下有增强信号作用。

2.3 标准曲线、线性范围

以峰面积为纵坐标，以对照品AFB1溶液浓度为横坐标，得标准曲线见图1。

2.4 方法检出限

由自动进样器吸取1ng/mL的标准工作溶液10μL，注入色谱仪中，平行进样3次，求出仪器检出限的平均值，而后求出方法检出限。结果见表3。

图1 AFB1标准曲线回归方程Fig.1Standard curve regression equation of AFB1

表3 AFB1检出限Table 3Detection limit of AFB1

由表3可知仪器平均检出限为0.00534ng，方法检出限为2.8μg/kg，可见，仪器和方法灵敏度很高，能满足日常检验要求。

2.5 加标回收率

表4 AFB1加标回收率Table 4Adding standard recovery of AFB1

将AFB1储备液稀释至5μg/mL，准确称取9份研碎混匀的试样各5.00g，置于100mL具塞三角瓶中，加入25mL50%甲醇水，分别准确移取0.01mL、0.05mL、0.1mL上述AFB1溶液各三份至9份试样中，其他步骤同1.3，计算加标回收率。

由表4可知，该方法回收率为93.3%～98.3%。符合GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测中的规定（80%～110%）。

2.6 重复性

准确称取6份研磨均匀的空白试样5.00g置于100mL具塞三角瓶中，分别准确移取1.00mL浓度为125ng/mL的AFB1标准容液，其他步骤同1.3，记录色谱图，测定峰面积。计算出RSD值。结果发现，RSD为0.30%，说明该方法具有良好的重复性。

3 实际样品分析

用建立的方法对市场上的饲料进行测定，结果表明：AFB1在大多数饲料中未检出。可能的原因是夏天温度过高，不适宜黄曲霉的繁殖与生长，也可能是这些饲料湿度均为10%以下，不适宜黄曲霉的繁殖与生长。

4 结论

建立了高效液相色谱串联质谱仪检测饲料中的AFB1残留方法，此方法检出限为2.8μg/kg，线性范围0～100.0ng/mL，回收率为93.3%～98.3%，精密度为0.30%。所建方法能够满足实际检测的需要。

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 8381-2008饲料中黄曲霉毒素B1的测定半定量薄层色谱法[S].北京：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,2008.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 30955-2014饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法[S].北京:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,2014.

[3]中华人民共和国农业部.NY/T 2549-2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定免疫亲和柱荧光光度法[S].北京:中华人民共和国农业部,2014.

[4]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 17480-2008饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法[S].北京:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,2008.

Detection of AFB1 in Feed

LIU ChaoJING Zan
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,LeShan 614000,China)

We tested aflatoxin B1 in feed with LC-MS/MS method.A method was developed with novel HPLC column Inertsil ODS-3,Mobile phase was 0.1%methanoic acidwater,0.1%methanoic acid acetonitrile,combined with MS, which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 313.0/285.0.A good linear in 0～100.0ng/mL.detection limit was 2.8μg/kg.Adding standard recovery was 93.3%～98.3%.This method has advantages of being fast,easy, reproducible and relatively sensitive compared with TLC and HPLC.

Feed;AFB1;LC-MS/MS

book=25,ebook=31

TS207

A

1008-1038(2015)12-0025-03

2015-06-26

刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全