刘翠盈

鸡腿菇菌种简易制作技术

刘翠盈

为适应我县“调整农业产业结构，大力发展食用菌生产”的需要，我县农业局于2009年12月创建食用菌菌种厂，我们利用简单的设备低成本进行了鸡腿菇、双孢菇、姬菇等食用菌的母钟、原种、栽培种制作，摸索出了一套成功的菌种制作技术，现以鸡腿菇为例介绍如下：

一、母种组织分离与培养

1、母种培养基配制。培养基配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、硫酸镁0.5克、磷酸二氢钾3克、VB110毫克、水1000毫升、pH值自然，马铃薯去皮去芽后切块，文火煮沸30分钟，用2—4层纱布过滤，取滤液，将称好剪碎的琼脂放入其中，文火加热不断搅拌到琼脂全部溶化。加入称好的葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、VB1等药品，补足水分到1000毫升，趁热分装试管，装量为试管长度的1/5—1/4。塞好棉塞，每5支试管用一张牛皮纸包扎棉塞部分，然后套上胶皮套成一把。

2、母种培养基灭菌。把上述捆成一把的试管培养基立放于手提式灭菌锅内加热，彻底排除冷空气后，在不超过120℃、0.0964兆帕的压力下维持30分钟，切断火源，压力自然降到零时，微开盖15分钟，取出试管摆成斜面，并注意抽样检查灭菌是否彻底。

3、接种箱消毒。选择商品性状优良、生长旺盛、菇体发育正常、无病虫害的幼嫩菇体作为种菇。种菇去脚连同0.1%升汞水溶液、无菌水、酒精灯、接种针、上述灭过菌的斜面培养基、75%的酒精及棉球一同放入接种箱内。尔后点燃保菇王气雾消毒剂3—4克/立方米，密闭半小时，杂菌杀灭率可达99.99%。

4、母种组织分离与培养。用75%的酒精棉球擦手消毒后，即可进入上述已消毒的接种箱操作：再次用75%的酒精棉球擦手，擦接种针，点燃酒精灯，接种针火燃灭菌。种菇浸入0.1%升汞水溶液中一分钟，无菌水冲洗三次，将种菇纵向切开，用灼烧、冷却以后的接种针挑取盖与柄交界处绿豆粒大小的一块组织移接到斜面培养基表面，塞好棉塞，放到24—26℃恒温箱或培养室培养，7—8天菌丝即可长满管。

转管纯化。将接种必备用具如酒精灯、接种针、待接试管等放于接种箱内，密闭气雾消毒30分钟，再将上述长满菌丝的试管用75%的酒精经表面消毒后带入接种箱，用灼烧、冷却以后的接种针挑取一小块菌丝（连同培养基）移接到待接斜面上。一只试管可移接20—30支母管，放24—26℃恒温箱或培养室培养，7—8天洁白浓密的菌丝即长满管而得母钟。

二、原种制作与培养

1、原种培养基配制。配方：麦粒10千克，轻质碳酸钙30克,石膏120克。麦粒预浸4—6小时，尔后煮沸到麦粒熟透无白心而不开花，捞出控水，拌入称好的轻质碳酸钙和石膏，装瓶（输液用500毫升玻璃瓶）到瓶肩处，擦净瓶口内外，塞好棉塞，牛皮纸包扎棉塞部分，套上胶皮带套。

2、原种培养基灭菌。把瓶装培养基放入手提式灭菌锅内，每锅可装13—14瓶。彻底排除冷空气后，在128℃、0.147兆帕的压力下维持2小时，切断火源，压力自然降到零，微开盖烤干棉塞后取出瓶，放清洁处防治污染，并注意抽样检查灭菌是否彻底。

3、接种箱消毒。将已灭过菌的原种培养基、接种必备工具如酒精灯、接种针、75%的酒精及棉球一同放入接种箱，点燃保菇王气雾消毒剂3-4克/立方米，密闭半小时后即可接种。

4、原种接种及培养。将母种试管表面用75%酒精棉球消毒后带入接种箱，点燃酒精灯，接种针火燃灭菌，待接种针冷却后，挑取母种试管内1—2块菌丝（连同培养基）放入原种培养基表面，塞好棉塞。一支母种可接4—8瓶原种，放适宜条件下培养，15—20天菌丝即长满瓶。

三、栽培种制作与培养

1、栽培种培养料配制。配方：棉皮50千克、麦麸5千克、石灰1千克、水75千克。鸡腿菇适宜在发酵培养料上生长，发酵方法：将原料称足，石灰溶于水拌入料中，充分拌匀，调整含水量在70%。料拌好后建高、宽各1.5米，长不限的料堆，为方便通气，堆要松且腰间扎孔，待堆内温度上升到65℃以上，等36个小时翻堆，上下内外翻动，使料换位，堆成原来堆形。料温又升到65℃以上，再等36个小时发酵结束。调整含水量在65%。采用直经15厘米、长30厘米、厚5—6um的聚丙烯塑料袋装料，两头扎口后等待灭菌。

2、栽培种培养料灭菌。栽培种用种量大可在自制的常压灭菌锅内灭菌。栽培种袋分层置于常压灭菌锅内，锅内加水煮沸，灶门中部温度达到100℃时计时，保持100℃10—12个小时后封火，维持6—8小时，然后取出袋放到接种室内。

3、接种室及缓冲间消毒。工作服、鞋、帽、口罩、75%酒精及棉球置于缓冲间，已灭菌的栽培种袋，75%的酒精及棉球、接种锄等置于接种室火炉旁。缓冲间、接种室分别按每立方米空间用甲醛10毫克和高锰酸钾5克进行熏蒸消毒，方法：将高锰酸钾放入容器内，然后注入甲醛溶液。密闭熏蒸24小时。

驱除室内残余甲醛气体：密闭熏蒸24小时后，室内残余甲醛气体对人眼睛有刺激作用，可用下列方法驱除：取浓度为25—28%的氨水，用量是甲醛用量的一半，或用碳酸氢铵5克/立方米空间进行熏蒸中和，半小时后，即可进入室内工作。

4、栽培种接种及培养。将原种瓶带入缓冲间，用75%的酒精擦手及原种瓶表面，换上工作服，戴上口罩，将原种瓶带入接种室接种。接种可以3—4人围坐火炉旁，一人持原种瓶，用接种锄去掉原种表层的培养料及菌丝后向栽培种袋内倒麦粒原种，另外2—3人解口、扎口。两头接种，一瓶原种接栽培种30—40袋。注意操作前应再次用75%酒精棉球擦手、擦瓶口、擦接种锄，锄头在炉火内烧红灭菌，冷却，并且接种工作严格在炉火上方形成的无菌区内进行，严防人员过频走动。接种后放适宜条件下培养，20—30天菌丝即可长满袋。经出菇试验即可用于生产。

四、菌种培养期间的管理

1、创造合适的生育条件。原种和栽培种接种后都要置于24—26℃、空气相对湿度60%、光线较弱的培养室内培养，并根据室内温度和空气湿度通风换气。

2、培养室消毒。培养室在放入菌种之前首先进行甲醛、高锰酸钾熏蒸消毒，方法同接种室消毒。之后，应隔6—10天室内喷洒一次5%石碳酸，每隔2—4天于瓶（袋）口喷一次石碳酸或其他消毒液，防止杂菌发生与污染。

3、随时和定期检查有无杂菌发生。一般在接种培养后的第三天开始检查有无杂菌发生，第六到第七天进行一次全面检查，之后随时检查，及时剔出污染的瓶（袋）。菌丝吃料后，结合查杂菌，同时改瓶(袋)立放为卧放，并经常改变位置，以便使培养料内水份均匀一致，有利于菌丝生长。

（作者单位：新河县农业局蔬菜站）