司志英 靳 英 李有才 (忻州职业技术学院 检验教研室，静乐 034000)

直肠癌为消化系统常见的一种恶性肿瘤，年发病率系消化系统肿瘤首位［1］。早期明确诊断，给予及时的手术治疗，往往预后较佳。由于直肠癌不具有早期的明显症状，不仅无法明确诊断，随着患者病变进展，还可能发生肝转移，也是影响手术治疗及预后的最主要因素［2］。研究显示，40.0%以上直肠癌患者确诊时，均发生远处转移，多数为肝转移［3］。另据文献报道，肝转移为直肠癌原发灶切除、晚期直肠癌患者死亡的关键因素［4］。本文回顾分析自2008 年10 月至2013 年10 月以来，于忻州市人民医院治疗的76 例直肠癌患者临床资料，旨在研究直肠癌肝转移患者肿瘤组织CD44 与CD166 阳性表达的临床意义。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 自2008 年10 月至2013 年10 月以来，于忻州市人民医院治疗的76 例直肠癌患者，依据是否出现肝转移将其分为研究组(肝转移组，n=40)、对照组(无肝转移组，n=36)，研究组:女22例，男18 例，年龄39～75 岁，平均(58.5±4.3)岁，病程6 个月～3 年，平均(2.3±0.6)年;对照组:男19 例，女17 例，年龄38～73 岁，平均(57.4±3.1)岁，病程10 个月～5 年，平均(2.2±0.4)年，两组在性别、年龄、病程方面均不存在统计学差异(P ＞0.05)。

1.2 纳入标准 血常规、肝肾功能未见异常者;入组前疾病情况经影像学证实者;病理证实系直肠腺癌者;年龄在30～70 岁之间者;对本文研究知情同意并签字者。

1.3 排除标准 排除既往过敏史、精神病史者;排除内科疾病或者其他严重临床并发症者;排除恶性肿瘤既往病史者;排除本文研究禁忌症者。

1.4 实验仪器及试剂 Nikon 光学显微镜、显微照相系统;D293 型隔水式恒温培养箱;SIEMENS Leica全自动脱蜡机;SIEMENS 1220HI 型烤片机、1210HI型捞片机、2145RM 型切片机。CD166 单抗;D44 单抗;聚合物辅助剂;二抗CD44/CD166 试剂盒:免疫组化SP 染色试剂盒;标记抗山羊辣根酶IgG 多聚体;小牛血清;PBS 缓冲液;DAB 试剂盒(均由北京中山生物科技有限公司提供)。

1.5 实验方法 SP 免疫组化法。厚4 μm 连续两张切片，于载玻片平铺，65℃环境下过夜。分别予以CD44、CD166 免疫组化。按照常规进行二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，以蒸馏水冲洗，以PBS 进行5 min 浸泡。以枸橼酸缓冲液于高压下实施抗原修复，3 min 高压锅喷气，室温下冷却。以3.0% 的H2O2于室温下进行5～10 min 孵育，以PBS 液进行3 min 振荡清洗，3 次重复后，滴加比例为1∶150 的CD44/CD166 羊抗人抗体，于37℃环境下进行1～2 h 孵育。以PBS 冲洗2 min，重复3 次后滴加聚合物辅助剂，于37℃环境下孵育20 min，以PBS 冲洗2 min，重复3 次后滴加标记抗山羊辣根酶IgG 多聚体，于37℃环境下进行20 min 孵育，以PBS 进行2 min 冲洗，3 次重复后以DAB 进行显色，于显微镜下控制染色程度，以自来水冲洗10 min，以苏木素进行复染2 min，予以盐酸酒精进行分化，以自来水冲洗10 min 返蓝。以梯度酒精常规脱水，以二甲苯透明，以中性树胶进行封片。

1.6 观察指标 观察研究组CD44、CD166 阳性表达与年龄、性别、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、Dukes 分期、组织分化等病理参数的相关性，观察对比两组肿瘤组织CD44、CD166 阳性表达情况，观察对比两组CD44、CD166 阳性表达对生存率的影响。

1.7 实验结果判定 以细胞质、上皮细胞膜呈棕黄色判定为CD44 阳性，切片无阳性细胞判定为CD44阴性。以细胞质、上皮细胞膜呈棕黄色判定为CD166 阳性，切片无阳性细胞判定为CD166 阴性。

1.8 统计学处理 选择SPSS19.0 软件对数据予以统计处理，其中计数资料对比选择χ2检验，计量资料以±s 表示，将P ＜0.05 作为统计学差异。

2 结果

2.1 两组肿瘤组织CD44、CD166 阳性表达情况对比 研究组CD44、CD166 阳性表达率分别为72.50%、85.00%，对照组CD44、CD166 阳性表达率分别为36.11%、41.67%，两组相较，呈明显差异(P ＜0.05)。具体如表1。

2.2 影响肝转移直肠癌肿瘤组织CD44 表达因素分析 直肠癌肝转移组肿瘤组织中CD44 表达，与年龄、性别、组织分化程度，无密切关系(P ＞0.05)，与浸润深度、Dukes 分期密切相关(P ＜0.05)。见表2。

2.3 影响肝转移直肠癌肿瘤组织CD66 表达因素分析 直肠癌肝转移组肿瘤组织中CD166 表达，与年龄、性别、组织分化程度，无密切关系(P ＞0.05)，与浸润深度、Dukes 分期密切相关(P ＜0.05)。见表3及图1～4。

2.4 CD44、CD166 表达对两组直肠癌患者生存率的影响对比 研究组CD44、CD166 阳性表达在1年、2 年、3 年、4 年、5 年各时间点的生存率情况，与对照组相较，均呈明显差异(P ＜0.05)。如表4。

表1 两组肿瘤组织CD44、CD166 阳性表达情况对比〔n(%)〕Tab.1 In tumor tissue of positive expression of CD44，CD166 two groups of contrast〔n(%)〕

表2 研究组CD44 阳性表达情况的影响因素分析〔n(%)〕Tab.2 Positive expression of CD44 factors〔n(%)〕

表3 研究组CD166 阳性表达情况的影响因素分析〔n(%)〕Tab.3 Positive expression of CD166 factors〔n(%)〕

表4 两组CD44、CD166 阳性表达对生存率的影响对比〔n(%)〕Tab.4 Two positive impact on survival comparison〔n(%)〕

图1 未转移直肠癌组织中CD44 以弱阳性表达为主Fig.1 CD44 was weakly expressed in colorectal cancer tissues

图2 肝脏转移直肠癌组织中CD44 表达呈强阳性Fig.2 CD44 expression was strongly positive in liver metastasis of rectal cancer

图3 未转移直肠癌组织中CD166 呈弱阳性表达Fig.3 CD166 was weakly expressed in tissues of colorectal cancer

图4 肝脏转移直肠癌组织CD166 呈强阳性表达Fig.4 CD166 was strongly expressed in liver metastasis of rectal cancer

3 讨论

CRC(大肠癌)为消化道最常见的一种恶性肿瘤。据文献报道，该病患病率可达到0.05%，并且呈逐年上升态势。目前，肝脏转移为直肠癌患者出现远处转移比较常见的部位，因早期无显著表现，诊断具有一定难度［5］。

文献报道，肿瘤由异质性细胞构成，肿瘤细胞克隆分化与干细胞十分相似。研究显示，因肿瘤干细胞为肿瘤起始细胞，能够维持肿瘤的分化，具有浸润、增殖以及异质特性。因此，肿瘤干细胞被认为是肿瘤的发生发展、复发转移的根源，对其高度表达的标记物进行研究，具有非常重要的临床价值［6］。

CD44 为细胞表面糖基化黏附分子，分布于内皮细胞、上皮细胞、纤维母细胞、单核细胞、粒细胞、T 细胞中，CD44 基因是高度保守的19～20 个外显子构成，在11 号染色体的短臂上，经转录后，不同修饰方式可生成两种蛋白，CD44s(标准型)、CD44v(变异型)。研究显示CD44 高表达，不仅体现肿瘤进展，同时可对肿瘤侵袭、转移起到促进作用［7］。

结直肠癌肝转移的生物学变化十分复杂，肿瘤细胞表面受体可识别和黏附基底膜，肿瘤细胞自身可分泌多种蛋白酶，这些蛋白酶可降解基底膜和细胞外基质，基底膜被降解后，可伸出伪足，向周围组织间质迁移。经脉管进入血液、淋巴循环并逃避免疫系统的攻击，最后伴随血液循环或淋巴循环到达继发部位，于继发部位组织发生黏附，形成克隆并增生生长，继而促使微血管生成;最后形成转移瘤。在本文结果中显示，直肠癌肝转移CD44 阳性表达，与未发生肝转移组呈显著差异，说明CD44 能够作为直肠癌肝转移的特征性标志物。对早期诊疗具有非常重要的临床意义。此外，本文结果显示，直肠癌Dukes 分期、浸润深度与CD44 具有密切关系，Dukes分期与CD44 高表达呈增高态势，说明CD44 能够促进直肠癌肿瘤细胞进一步侵袭转移，对治疗方案的制定，也具有非常重要的临床意义。CD166 为免疫球蛋白超基因家族中的成员，不仅能够与机体淋巴细胞的抗原CD6 特异性结合，表现为同嗜性黏附、同型间结合，而且可以呈异嗜性黏附、异型间结合。CD166 在肿瘤组中呈高表达状态，而且能够调节肿瘤的生长、转移［8］。本文结果显示，直肠癌肝转移CD166 阳性表达，与未发生肝转移组有显著差异，说明CD166 也能够作为直肠癌肝转移的特征性标志物。对早期诊疗也具有非常重要的临床意义。同时，本文结果显示，直肠癌Dukes 分期、浸润深度与CD166 均具有密切关系，而Dukes 分期与CD166 高表达呈增高态势，说明CD166 同样能够促进直肠癌肿瘤细胞进一步侵袭转移。

文献报道，CD166 低表达的肿瘤，其肿瘤细胞与原发灶的黏附性降低，便于其发生转移，进而促进肿瘤细胞向远处转移［9］。但是也有临床病例研究报道［10］，CD166 的高表达与大多数肿瘤的侵袭性、转移及预后相关，我们的实验结果与之相吻合。此外，也有一些有文献报道，在直肠癌病例中，肿瘤组织中MVD(微血管密度)明显升高，而且与CD166 的高表达呈正相关，此外与正常血管内皮细胞相比，由血管生成而来的血管内皮细胞的CD166 阳性表达更高。说明CD166 可通过促进新生血管的生成，促进肿瘤的进一步转移。

综上所述，直肠癌患者肿瘤组织CD44、CD166阳性表达，是肝转移的特征性标志物，能够判定直肠癌发生、发展过程，有助于直肠癌早期诊疗方案的制定。

［1］张 蓓，刘志苏，黄汉涛，等.碳酸酐酶Ⅸ在直肠癌中的表达及其与血管内皮生长因子和肝转移关系［J］.中华实验外科杂志，2010，27(12):1898-1900.

［2］孙 毅，尚 革，包永星，等.77 例直肠癌伴肝转移患者的预后因素分析［J］.中华肿瘤杂志，2010，32(8):622-625.

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［4］沈艺南，黄晟宇，胡贤荣，等.腹腔镜肝切除术治疗结肠癌肝转移的系统评价［J］.临床肝胆病杂志，2014，30(12):1287-1291.

［5］中华医学会外科学分会胃肠外科学组，中华医学会外科学分会结直肠肛门外科学组，中国抗癌协会大肠癌专业委员会等.结直肠癌肝转移诊断和综合治疗指南(V 2013)［J］.中华胃肠外科杂志，2013，16(8):780-788.

［6］苏 琳，吕春龙，高 品，等.β1 整合素在结直肠癌肝转移组织中的表达及其临床意义［J］.中华实验外科杂志，2014，31(9):2029-2031.

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［10］Sun，Lichao，Hu，Hai，Peng，Liang.P-Cadherin promotes liver metastasis and is associated with poor prognosis in colon cancer［J］.Am J Pathol，2012，179(1):380-390.