施建新，闵仲生

（江苏省中医院，南京 210029）

痤疮是一种临床常见毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，各年龄皆可发病，以青少年发病率为最高。5-氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）是近年来快速发展的一种治疗痤疮的新型方法。本研究参考临床使用ALA 的浓度及孵育时间，旨在研究不同浓度ALA-PDT 对不同浓度痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的体外抑制效果。

1 材料与方法

1.1 菌株与试剂 P.acnes 标准菌株（ATCC11827，购自广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心）；5-氨基酮戊酸（由上海复旦张江生物医药股份有限公司提供）；琼脂（L3027，购自美国Sigma-Aldrich公司）；厌氧产气袋（购自三菱瓦斯化学株式会社）。

1.2 主要仪器 高能窄谱光动力治疗仪[由安徽航天生物科技有限公司提供，采用半导体固态冷光源，波长（640±10）nm，光功率密度2～230 mW/cm2]

1.3 方法

1.3.1 悬液的制备 在微生物限度室，使用涂布接种法复活P.acnes 菌株，肉汤增殖法体外扩增培养，麦氏比浊法测定P.acnes 浓度，调整菌最大浓度为1.7×108CFU/mL（Colony forming units），依次稀释至1.7×107CFU/mL、1.7×106CFU/mL、1.7×105CFU/mL、1.7×104CFU/mL，加入96 孔板中，每种浓度细菌设48 孔，每孔菌液200 μL。

1.3.2 实验分组 实验组：ALA-PDT 组分为5g/L、3.6 g/L、2.5 g/L 等3 组，在96 孔板中加入对应质量的ALA，置于37 ℃培育箱中，避光孵育15 min。

对照组：（a）ALA 组分为5 g/L、3.6 g/L、2.5 g/L 3 组，对应各浓度组96 孔板中加入相应质量的ALA，置于37 ℃培育箱中，避光孵育15 min。（b）细菌红光组。（c）细菌组。

1.3.3 处理方法 将ALA-PDT 组与细菌红光组96 孔板垂直置于光源下20 cm 处，调整光斑直径至10 cm，刚好将96 孔板完全覆盖，测定光功率密度为80 mW/cm2，照射时间15 min。同时ALA 组与细菌组96 孔板仍避光置于37 ℃培育箱中，直至ALA-PDT组与细菌红光组照光结束。

照光结束后，同组每孔吸取100 μL 菌液，均匀混合，最后同组取0.5 mL 均匀混合液，在90 mm 标准培养皿中采用倾注培养法浇板，培养皿置于厌氧培养盒中采用厌氧培养法培养2 d，培育箱设定为37 ℃。……