宋 佳，段树卿，李云霞#（1.承德医学院研究生院，河北承德 067000；.颈复康药业集团有限公司，河北承德 067000）

心神宁片由酸枣仁、远志、茯苓、栀子、神曲、甘草等六味中药组成，收载于国家药品标准[WS-10410（ZD-0410）2002-2012Z]，具有养血除烦、宁心安神的功效，可用于心肝血虚、失眠多梦、烦躁而惊、疲倦食少等症。现行国家标准中含量测定项下只测定了栀子苷含量一项[1]。目前，国内外有对心神宁片中酸枣仁皂苷A、B 及栀子苷含量测定的相关报道[1-3]，但未见心神宁片中测定甘草苷含量的报道。为此，笔者参考相关文献[4-8]，采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定了心神宁片中栀子苷、甘草苷的含量，以为心神宁片的质量控制提供参考。

1 材料

Agilent 1100 HPLC 仪，包括G1322A 型真空脱气机、Agilent 1100 型泵、G1313A 型自动进样器、紫外检测器、Chem-Station 色谱工作站（美国Agilent 公司）；KQ-500DE 型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：500 W，频率：40 kHz）；AE 240 型十万分之一电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

心神宁片（颈复康药业集团有限公司，批号：392170、492009、492016、492043、492241、492242、492247；某药厂市售，批号：140519、140802、140804，规格均为0.25 g/片）；栀子苷对照品（批号：110749-201316，纯度：97.5%）、甘草苷对照品（批号：11610-201106，纯度：93.7%）均购于中国食品药品检定研究院；乙腈（美国Fisher公司）为色谱纯；乙醇（天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司）为分析纯，水为三级反渗法制得的纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～10 min，12%A→19%A；10～18 min，19%A～30%A；18～21 min，30%A→12%A）；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；检测波长：238 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 精密称取栀子苷、甘草苷对照品适量，加入70%乙醇，制成每1 ml含栀子苷0.08 mg、甘草苷0.04 mg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取心神宁片数片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，称定质量，超声处理45 min，放冷，再次称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，续滤液经0.45µm的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方中的药味比例，分别配制不含栀子和甘草的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.3 专属性试验

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。结果，在该色谱条件下，阴性样品对测定无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.缺甘草的阴性样品；B.缺栀子的阴性样品；C.供试品；D.混合对照品；1.栀子苷；2.甘草苷Fig 1 HPlC chromatogramsA.negative samples without Glycyrrhiza uralensis；B.negative samples without Gardenia jasminoides；C.test sample；D.mixed reference；1.geniposide；2.liquiritin

2.4 线性关系考察

精密称取栀子苷、甘草苷对照品各适量，加入70%乙醇分别制成每1 ml含栀子苷0.815 9 mg、甘草苷0.371 8 mg的对照品母液；分别精密量取上述对照品母液25 ml，置于同一50 ml量瓶中，制成每1 ml 含栀子苷、甘草苷0.185 9 mg 的混合对照品贮备液。分别精密吸取对照品贮备液1、2、4、5、6、8、25 ml，置于25 ml 量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得栀子苷、甘草苷回归方程分别为y＝11 663x+11.482（r＝0.999 9）、y＝19 034x+16.519（r＝0.999 9）。结果表明，栀子苷、甘草苷质量浓度在16.3～407.9、7.4～185.9 μg/ml范围内与各自峰面积呈良好的线性关系。

2.5 定量限与检测限

以信噪比为10 计算栀子苷、甘草苷的最低定量限分别为5.439、2.478 6 ng；以信噪比为3 计算栀子苷、甘草苷的最低检测限分别为1.813、0.826 2 ng。

2.6 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下栀子苷和甘草苷质量浓度分别为0.081 6、0.037 2 mg/ml的混合对照品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果，栀子苷、甘草苷峰面积的RSD分别为0.67%、0.78%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：492009）10 μl，分别于放置0、2、4、6、8、10、12 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、甘草苷峰面积的RSD 分别为0.80%、1.63%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

精密称取心神宁片（批号：492009）粉末适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6 份，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、甘草苷的平均含量分别为8.725 8、3.404 9 mg/g，RSD分别为1.46%、0.74%（n＝6），表明本方法重复性较好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：492009）约0.25 g，共9份，分别加入一定量的混合对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Result of recovery test（n＝9）

2.10 样品含量测定

取10 批心神宁片适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，按外标法计算样品含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝9，mg/g）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝9，mg/g）

3 讨论

3.1 色谱条件的优化

笔者以二级阵列检测器对栀子苷、甘草苷进行全波长波长（200～400 nm）扫描，结合3D图谱，发现二者在238 nm波长处均有较大吸收，故选用238 nm为检测波长；又考察了两种色谱柱CAPCELL PAKMG C18、Inertsil ODS-3，其中Inertsil ODS-3分离效果较好，且分离时间适中，因此选用Inertsil OD-3进行色谱分离。

3.2 提取方法的选择

笔者比较了3 种提取方法（索氏提取除杂再进行超声、先超声再进行萃取除杂、直接超声），结果发现3种方法均对被测成分无干扰且可较好地分离，考虑到操作的简便性，故选用直接超声法。此外，还考察了不同溶剂（甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇）对结果的影响。结果发现，采用70%乙醇与甲醇作为提取溶剂时，栀子苷含量基本一致，均能较好地提取分离栀子苷与甘草苷，考虑到乙醇的毒性小，故选用70%乙醇为提取溶剂。又考察了超声时间（30、45、60、90 min）对结果的影响。结果发现，超声45 min 即可提取完全。

综上所述，本方法准确、灵敏、简便，可用于心神宁片中栀子苷和甘草苷的含量测定。

[1]郭五保，李彤晖，王卫峰.HPLC 测定心神宁片中栀子苷的含量[J].华西药学杂志，2003，18（4）：292.

[2]尹美芝，张瑞华，崔雅慧，等.心神宁片中栀子苷含量影响因素的考察[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：52.

[3]高雪松，王蕾.HPlC-ElSD法测定心神宁片中酸枣仁皂苷A和B的含量[J].中国药师，2013,16（1）：61.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：80.

[5]侯玉华，李智，李俊雅，等.RP-HPLC 法测定复方丹栀逍遥丸中栀子苷的含量[J].中国药房，2010，21（47）：4 480.

[6]张丽萍.用高效液相色谱法测定安坤颗粒中栀子苷和芍药苷的含量[J].药学实践杂志，2014，32（2）：121.

[7]张科卫，崔晓兵，吴皓.双波长梯度洗脱法测定栀子柏皮汤制剂中栀子苷、甘草苷的含量[J].中成药，2008，30（11）：1 629.

[8]胡震，杨广得，罗国安，等.栀子中栀子苷提取工艺及HPLC分析[J].中成药，2006，28（3）：336.