菌阴肺结核中结核感染T细胞斑点试验的诊断价值分析

丁佳臣, 何小敏, 何小峰, 杨建功

(江苏省泰兴市人民医院 感染科, 江苏 泰兴, 225400)

关键词:肺结核; 菌阴; T-SPOT.TB

随着大气污染的越来越严重，肺结核逐渐成为全球传染性疾病中首要致死因素。2011年的世界卫生组织估计全球约有870万例新发结核病患者，其中有超过100万例死于结核病[1]。因此，快速、准确地诊断活动性结核患者对于结核病的防控、治疗极其重要。传统的痰抗酸杆菌涂片在肺结核患者中敏感性较低，使得菌阴肺结核在临床诊断中有一定的困难。T-SOPT.TB作为新型的结核诊断工具之一，具有较高的敏感性和特异性，本研究试图调查T-SPOT在菌阴肺结核中的情况，与痰菌阳性患者-SOPT.TB阳性率比较，评价其诊断价值。

1资料与方法

1.1　一般资料

收集资料较为齐全2013年4月—2015年4月在本院就诊的肺结核患者共205例，其中男164例，女41例，平均年龄55.5岁。包括: ① 肯定为肺结核病:痰检抗酸杆菌阳性，即菌阳肺结核；②很可能为肺结核病：临床表现、影像学或病理组织学检查支持肺结核，但结核杆菌检查阴性，即菌阴肺结核。

1.2　方法

1.2.1痰涂片：清晨收集脓性痰，进行抗酸杆菌染色，在显微镜下观察染色结果，以每100个视野抗酸杆菌3～9个为1+，每10个视野抗酸杆菌1～9个为2+，每1个视野抗酸杆菌1～9个为3+，每1个视野抗酸杆菌>10个为4+。

1.2.2T-SPOT.TB: 患者空腹，用肝素抗凝管采集8 mL外周静脉血，分离外周血单个核细胞后备用,取出T-SPOT.TB试剂盒(上海复星科技有限公司提供)内微板孔，将阴性对照加入细胞培养液，阳性对照加入植物血凝素，分别在两孔中加入ESAT-6即抗原A和CFP-10即抗原B，将分离好的单个核细胞添加孔中, 用培养箱孵育，经过2 h孵育后洗脱PBS, 显色后终止PBS，接着计量斑点数目, 阳性结果的判断指的是计数孔点比阴性孔多5个点或超过阴性对照的两倍。

2结果

205例肺结核患者中，痰涂片阳性肺结核103例，其中结核感染T阳性90例(87.3%),TSPOT阴性13例(12.7%)。痰涂片1+组22例，其中TSPOT阳性20例(90.9%),阴性2例(9.1%)。痰涂片2+组21例，其中TSPOT阳性17例(81%),阴性4例(19%)。痰涂片3+组30例，其中TSPOT阳性26例(86.7%),阴性4例(13.3%)。痰涂片4+组30例，其中TSPOT阳性28例(93.3%), 阴性2例(6.7%)。痰涂片阴性肺结核102例，其中TSPOT阳性70例(68.6%), TSPOT阴性32例(31.4%)。 菌阳肺结核的TSPOT结果：TSPOT的阳性率不随着痰菌的增加而增加。4组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

菌阳、菌阴肺结核患者的TSPOT的比较，菌阳肺结核患者的TSPOT的阳性率高于菌阴肺结核。2组痰涂片比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

3讨论

通常痰涂片(抗酸染色法)阳性即诊断为肺结核，因其留取标本方便，检查方法简单，从而在临床上是结核杆菌细菌学检查的首选方法，也是判断传染性强弱的指标。有研究[2]认为清晨痰的阳性率在三种痰中阳性率最高，但总体的阳性率较低。痰涂片阳性率总体不高的原因有各个方面的原因: ① 痰标本的取样时间; ② 痰标本的性状; ③ 检测痰的次数; ④ 检验使用的显微镜的视野数; ⑤ 结核患者病人常常为刺激性干咳，痰少甚至无痰; ⑥ 部分患者留取标本方法不当等。本研究发现痰菌阳性率50%，与既往的报道相比略高，但仍有一半左右为菌阴患者，使得临床上在菌阴肺结核的诊断通常需要其他的相关指标，

TSPOT检测在其中有较高的临床诊断价值。

表1　不同数量的痰菌的TSPOT的比较[n(%)]

表2　菌阳、菌阴肺结核患者的TSPOT的比较[n(%)]

T-SPOT.TB是诊断结核感染的新方法，具有较高的敏感性和特异性, 本回顾分析结果表示TSPOT在肺结核诊断中的敏感性78%，与既往研究[3-5]结果一致。其中在菌阴肺结核中的敏感性为70%，提示在菌阴肺结核的诊断中有一定的价值。同时，发现在菌阳肺结核中不同痰菌的TSPOT阳性率无明显差别，不随着痰菌越多，阳性率变高，但和菌阴肺结核的结果有明显的差别，存在一定的矛盾。分析认为产生差别可能的原因菌阴病例混有误诊病例: ①如变态反应产生的肺部改变、病毒性肺炎等，自限性疾病，不需抗结核治疗，也会好转; ② 常规的抗结核药物中异烟肼、利福平对一些特殊细菌感染有疗效; ③ 在部分菌阴肺结核患者未能行病理的检查。临床上在菌阴肺结核部分患者以临床症状减轻，X线片或CT上病灶变小从而诊断肺结核纳入治疗，诊断并不可靠。在临床医疗工作中，对与临床症状、胸片支持肺结核，但痰菌阴性的患者同时TSPOT阴性，考虑抗结核药物可能的一系列副作用，建议更长时间的观察，寻找在卡介苗中缺失的蛋白作为抗原刺激，提高TSPOT检测的敏感性及特异性，从而可增加在菌阴肺结核的诊断准确率。

参考文献

[1]Glaziou P, Falzon D, Floyd K, et al.Global epidemiology of tuberculosis[J]. Semin Respir Crit Care Med, 2013, 34(1): 3.

[2]周东鹏, 李慧娟, 王伟, 等. 肺结核患者抗酸染色查分枝杆菌的结果分析[J]. 医学论坛杂志, 2012, 33(9): 119.

[3]曾谊, 冯枭, 宋梅梅, 等. 酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核诊断中的价值[J].中国防痨杂志, 2012, 34(2): 100.

[4]Dai Y, Feng Y, Xu R, et al. Evaluation of interferon-gamma release assays for the diagnosis of tuberculosis: an updated meta-analysis[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2012, 31(11): 3127.

[5]陶臻, 曾娟. 结核感染T细胞斑点实验在结核诊断中的应用价值[J]. 临床肺科杂志, 2012, 9(9): 1632.

通信作者:何小敏, E-mail: hxmlq@163.com

收稿日期:2015-05-26

中图分类号:R 521

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)21-195-01DOI: 10.7619/jcmp.201521075