李文华　刘增香　谢　桃　张雪霞

中山大学附属第五医院　1　检验科　2　儿科　3　体检科　4　麻醉科，广东省珠海市　519000



腹泻粪便中金黄色葡萄球菌两种检测方法的对比分析

李文华1刘增香2谢桃3张雪霞4

中山大学附属第五医院1检验科2儿科3体检科4麻醉科，广东省珠海市519000

摘要目的：分析腹泻粪便中金黄色葡萄球菌检验的临床价值。方法：收集2014年1-12月本院收治的1 326例腹泻患者临床资料，均采取PCR基因扩增法及细菌培养方法进行粪便中金黄色葡萄球菌的检测，分析患者临床特征，最后探讨其方法的检测价值。结果：1 326例腹泻患者中，PCR检出金黄色葡萄球菌性比例为10.41%，明显高于培养法的6.49%，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)；PCR方法检出的138例金黄色葡萄球菌性大多是儿童，肠外并发症发生率为28.99%，明显高于阴性患者的9.09%，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。结论：相比于培养法，PCR法在金黄色葡萄球菌的临床检验中的检出率较高，值得临床推广应用。

关键词腹泻金黄色葡萄球菌PCR检测培养法

金黄色葡萄球菌引起的肠炎属于一种全球性的肠道传染疾病，患者可出现严重的胃肠炎、腹泻等临床症状，并发败血症、呼吸道、肠道外并发症等疾病[1]，金黄色葡萄球菌主要是通过产生的肠毒素对人体构成危害。为了探讨腹泻粪便中金黄色葡萄球菌检验的临床价值，2014年1-12月，本院对收治的腹泻患者留取粪便，分别采取PCR基因扩增方法与细菌培养方法进行金黄色葡萄球菌的检测，现介绍如下。

1资料与方法

1.1一般资料收集2014年1-12月本院收治的1 326例腹泻患者临床资料，其中男764例，女562例，年龄5个月~79岁，平均年龄(28.82±4.76)岁。其中成年患者518例，未成年患者808例。所有患者每天排便次数均超过3次，并伴随性状改变。

1.2所需物品

1.2.1化学试剂：Taq酶、DNA标记引物(正向引物、反向引物)购自大连宝生物工程公司，FTA缓冲液购自Whatama公司。血平板、麦康凯平板、高盐甘露醇(MS)培养基、转运肉汤购自郑州博赛生物公司。

1.2.2实验仪器：PCR基因扩增仪，DXY-33A型电泳仪，华粤企业集团有限公司UVIpro凝胶成像系统，德国HELA公司生产的CO2恒温培养箱，美国BD公司凤凰100全自动细菌鉴定仪。

1.3方法1 326例腹泻患者均采取PCR基因扩增法与细菌培养方法进行金黄色葡萄球菌的检测，观察患者临床特征，探讨PCR方法的检测价值。在Cary-Blair保存液内放置患者粪便样本，样本量是0.5g，置于增菌液中进行培养。(1)PCR方法：取0.5g粪便加入4.5ml生理盐水混匀，将200μl混合物提取出来后，提取DNA。扩增产物的长度是279bp，反应预混合液、模板、引物等成为了反应体系的重要组成部分。反应温度在94℃下，通过变性、循环、电泳及成像技术检测粪便中金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(NUC)。(2)培养法：将保存液中的粪便接种在血平板和麦康凯平板、高盐甘露醇(MS)培养基上，挑取高盐甘露醇(MS)培养基上金黄色可疑菌落或者血平板上有溶血环的菌落，通过鉴定仪做细菌鉴定。

1.4统计学方法本文数据均采用SPSS18.0统计学软件处理，计数资料对比采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1对比PCR法及细菌培养方法的金黄色葡萄球菌检出率1 326例腹泻患者中，PCR法对金黄色葡萄球菌性肠炎的检出率为10.41%(138/1326)，培养法对金黄色葡萄球菌性肠炎的检出率为6.49%(86/1326)，两种方法检出率对比，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。

2.2对比金黄色葡萄球菌阳性与阴性患者特征PCR检出金黄色葡萄球菌肠炎138例中大多为儿童，占77.54%，与阴性相比差异显著(P<0.05)，大多数出现胃肠道方面的临床症状。阳性出现肠外并发症为28.99%，明显高于阴性患者的9.09%，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　金黄色葡萄球菌阳性与阴性患者特征比较〔n(%)〕

注：与阴性患者对比，*P<0.05，差异显著，具有统计学意义。

3讨论

金黄色葡萄球菌的临床症状主要包括胃肠型症状、肠道外感染等[2]。胃肠型症状主要出现腹泻腹痛、恶心呕吐等现象，肠道外的感染主要包括肝脾、自身免疫性疾病以及关节炎、脑膜炎等。此疾病的感染传播主要通过进食污染严重的食物、水，由金黄色葡萄球菌引起的腹泻具有明显的季节性，呈夏秋高、冬春低的规律，通过了解患者病史，发现52.6%的病例有进食隔日剩下的熟食或食用凉拌菜等情况，这些食品尤其在夏季是细菌生长的良好环境，细菌繁殖极快，食用后最容易引起急性腹泻，提高了感染的发生率。另外，在临床中没有正确认识与重视金黄色葡萄球菌，滥用非敏感性抗生素，导致肠道菌群的严重失调，也会加剧肠道外并发症，从而难以改善患者预后情况。

在本次调查中，分别采取PCR[3]及细菌培养方法分离金黄色葡萄球菌。细菌培养法方便简单，但是实验员需要利用肉眼判断，其判断缺乏准确性，补充实验多，而且培养时间较长。PCR基因扩增法的检出率比较高，需要检测时间较短，减少了污染的几率[4]。目前国内外采用的PCR 方法检测致病菌一般都需要进行前增菌，虽然能提高检测的灵敏度，但相应的增加了检测的时间，一般延长2 ～12h。本试验采用FTA 滤膜直接提取DNA 模板，无需增菌[5]，方法操作简便、快速，有效避免了工作人员在处理标本时可能造成的感染。

在本文中，分析了金黄色葡萄球菌感染的腹泻患者的临床特征，儿童发生率为77.54%；患者肠胃炎发生率为59.42%，阑尾炎发生率为11.59%，肠外并发症发生率为28.99%。这主要是儿童没有形成良好的饮食卫生习惯，提高了粪口传播感染的发生率。随着金黄色葡萄球菌耐药率的增加，也构成了其定植或者传染的主要因素[6]。因此，家长应该加强对儿童的健康教育，勤洗手，不吃不卫生的食品和过期的食品。患者大多数出现肠胃道等症状，临床医生应该结合其他检查方法鉴别患者合并疾病，再采取合适的治疗方案。

综上所述，在粪便中检出金黄色葡萄球菌，PCR法比细菌培养法具有更高的检出率；而且本次资料表明金黄色葡萄球菌是引起急性肠道感染的主要病原之一，以往由于缺少常规检测手段，由此类细菌感染引起的急性腹泻不能及时被明确诊断，从而造成实验室漏检和临床误诊。在临床中更加需要重视患者肠道外表现，采取早期细菌检验，对改善患者预后情况具有积极作用。

参考文献

[1]巢国祥,焦新安,周丽萍，等.食源性金黄色葡萄球菌流行特征、产肠毒素特性及耐药性研究〔J〕.中国卫生检验杂志,2006,16(8):904-907.

[2]张爱华,刘瑜.腹泻粪便中金黄色葡萄球菌检验的价值分析〔J〕.中外医学研究,2013,11(4):72-73.

[3]付素兰,刘景武,孙文泽.一种快速简便的模板提取方法用于PCR检测粪便中的金黄色葡萄球菌的研究〔J〕.河北医药，2014,5(36):1295-1297.

[4]郑浩轩,姜泊.金黄色葡萄球菌感染在腹泻病人中的临床调查〔C〕//2010年广东省中医、中西医结合脾胃消化病学术会议论文集,2010:167-168.

[5]Tack LC,Thomas M,Reich K.Automated forensic DNA purification optimized for FTA card punches and identifiable STR-based PCR analysis〔J〕.Clin Lab Med,2007,27(1):183-191.

[6]许磊,曾德唯,甘忠志,等.重庆市南岸区2009-2010年感染性腹泻病原菌监测及药敏结果分析〔J〕.重庆医学,2012,8(41):2402-2404.

(编辑紫苏)

收稿日期2015-03-29

中图分类号：R446.1

文献标识码：B

文章编号：1001-7585(2015)18-2522-02