蒙发明

（中山奕安泰医药科技有限公司 广东中山 528437）

阿普斯特是一种磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂，阻止类风湿滑膜细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）而产生抗炎活性，主要用于治疗活动性银屑病关节炎[1]。阿普斯特有效成分为S 构型，其对应异构体R 构型对其效果有较大影响；为了控制阿普斯特产品质量，本文对阿普斯特对映异构体进行了方法学研究。

一、仪器与试药

1.仪器

岛津LC-15C 高效液相色谱仪、梅特勒XS204 电子天平。

2.试药及试剂

阿普斯特对照品（自制，批号为20150101，含量99.3%)，阿普斯特对映异构体对照品（自制，20150103,含量100%)；阿普斯特产品（自制，批号为150201， 150202， 150203）；正己烷（色谱纯）；乙醇（色谱纯）；甲醇（色谱纯）。

二、方法与结果

1.色谱条件

色谱柱为大赛璐Chiralpak AS-H 手性柱；以正己烷-乙醇（20:80)为流动相；检测波长230nm；室温：30℃；流速1.0ml/min；进样量：20ul。理论板数按照阿普斯特计不得低于1500，阿普斯特与其对应异构体的分离度应符合要求。

2.对应异构体的测定

取阿普斯特样品适量，用甲醇制成约0.5mg/ml 溶液，作为供试品溶液；精密取供试品溶液1ml,用甲醇稀释至100ml,作为对照溶液；分别取阿普斯特对照品及阿普斯特对应异构体对照品适量，置于同一容量瓶中，用甲醇溶解并制成含阿普斯特0.5mg/ml 及其对应异构体为25ug/ml 溶液，作为系统适应性溶液。分别取供试品溶液、对照溶液、系统适应性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有与系统适应性色谱图中阿普斯特对应异构体保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.5 倍（0.5%）。

3.对映异构体方法学考察

（1）空白试验及系统适应性试验：取2.2 项下系统适应性溶液及甲醇溶剂，按照2.1 色谱条件检测，记录色谱图（见下图），表明空白溶剂甲醇不干扰阿普斯特及其对应异构体的检测，系统适应性色谱图中，理论板数以阿普斯特计符合规定，阿普斯特与其对应异构体分离度符合要求。

（2）准确度：称取4 份阿普斯特对照品约25mg，置于50ml 的容量瓶，其中一份不加阿普斯特对应异构体溶液，其余3 份分别加入阿普斯特对应异构体溶液适量，制成相当于阿普斯特对应异构体0.1%、0.5%、1.0%浓度的溶液，取以上4 份溶液，按照2.1 色谱条件测定，每个溶度独立测定三次。计算加入阿普斯特对映异构体的回收率。结果显示平均回收率为98.7 %, RSD为1.52%，符合实验要求

（3）精密度：分别配置系统适应性溶液6份，按照2.1色谱条件检测，分别考察阿普斯特及其对映异构体的保留时间及主峰面积的相对标准偏差（数据见下表）。结果显示，阿普斯特主峰保留时间RSD%为0.08%，主峰面积RSD%为0.56%；阿普斯特对映异构体保留时间RSD%为0.13%，峰面积RSD 为0.64%，本方法精密度符合要求。

（4）线性范围：取阿普斯特对映异构体对照品约25mg，精密称定，置于50mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对映异构体贮备溶液（0.5mg/mL）；精密量取5mL 置于100mL 容量瓶（25ug/mL），加甲醇稀释至刻度，摇匀．分别精密量取0.1,0.2,0.5,1,2,4mL，置于10mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，依法测定。以浓度C 对阿普斯特对映异构体主峰面积A 进行线性回归（见下图），得回归方程为：

Y=33.94X+0.4647，R=0.9999 结果表明，阿普斯特对映异构体浓度在0.25 ～10ug/mL 范围内线性关系良好。

（5）溶液稳定性试验：取2.3.2 项下一份溶液，分别放置在室温下0 小时、1 小时、2 小时、4 小时、8 小时。放置后，按照2.1 色谱条件依法测定，考察阿普斯特及阿普斯特对应异构体的峰面积的相对标准偏差。结果显示阿普斯特峰面积的RSD 为1.11%，阿普斯特对映异构体峰面积的RSD 为1.74%．结果表明，该方法检测配置的溶液在8h 以内稳定。

（6）检测限及定量限的确定：取2.3.2 项下一份溶液，用空白溶剂甲醇作为稀释剂，逐步稀释，并进样测定，以信噪比刚好大于10，作为阿普斯特对映异构体的检测限；以信噪比刚好大于3，作为阿普斯特对映异构体的定量限；实验结果显示定量限为0.15ug/mL；检测限为0.04ug/mL。定量限为常规检测量的0.03%，检测限为常规检测量的0.008%。

（7）耐用性：通过改变色谱柱生产厂家、5%比例改变流动相组成、柱温。分别进行系统适应性试验，结果表明均不影响阿普斯特及其对应异构体的检测。

（8）三批样品测定：取阿普斯特3 批样品，用甲醇制成0.5 mg/mL 溶液，依法测定。结果3 批产品的对映异构体含量分别为0.11%、0.13%、0.07%。

三、讨论

本实验对HPLC 法测定阿普斯特的对映异构体进行了方法学研究，用采用大赛璐Chiralpak AS-H 手性色谱柱；以正己烷-乙醇（20:80）为流动相：检测波长230nm：流速1.0ml/min，阿普斯特对映异构体和阿普斯特的相对保留时间分别约为0.71 和1.00；其分离度符合要求，方法学各项考察指标均符合方法学考察要求，故该液相色谱法可用于阿普斯特的对映异构体的检测。

[1] 陈建超; 孙铁民; 阿普斯特.中国药物化学杂志.2014年第24 卷第5 期 418-418 页