胡 昌 宋 明 河南省济源市畜牧局动物卫生监督所 459000

1 材料和方法

1.1 材料

（1）试验菌株。8 株猪大肠杆菌（E.coil）分离自大肠菌感染的猪体，8 株猪链球菌株分离自感染的病猪，均来源于河南省内猪场，由河南农业大学牧医工程学院传染病实验室自行分离保存。

（2）试剂和药物。抗菌肽和牛肉膏（生化试剂）购自北京奥星生物技术有限公司，批号20070720；蛋白胨（生化试剂）购自北京奥星生物技术有限公司，批号20081102；氯化钠（分析纯）购自天津北方天医化学试剂厂，批号20080924；磷酸氢二钾（分析纯）购自上海恒信化学试剂有限公司，批号20080602。

（3）仪器。电热温恒温培养箱：HG303-4 南京实验仪器厂制造；净化工作台：SW-CT-1C 苏净集团安泰公司生产；手提式不锈钢蒸汽消毒器：YX280B上海三申医疗器械有限公司；双目生物显微镜：CX21日本奥林巴斯。

1.2 方法

（1）菌种的复苏和纯化。将实验室保存猪源大肠杆菌的甘油菌种划线接种营养琼脂平板培养基，猪链球菌接种于血平板，37℃培养24 小时，挑取单个菌落，涂片染色镜检，观察细菌的大小和形态，选取典型菌体进行试验。

（2）细菌接种量的确定。用普通肉汤培养基将抗菌肽原液倍比稀释为1／10 倍~1／2560 倍9 个浓度，加入灭菌试管中。两种细菌每组随机选取4 株，用生理盐水将猪源大肠杆菌和猪链球菌以镜检计数方式配成1×107cfu·mL、1×106cfu·mL、1×105cfu·mL、1×104cfu·mL4 种浓度的细菌悬液，分别接种于含不同药物梯度的普通肉汤培养基中。另做不含药物的培养基，接种菌悬液，作为生长菌的空白对照。于37℃培养24 小时观察各菌株的生长情况，以未有细菌生长的最小药物浓度为MIC。……