徐 静，孙建新

(河北省秦皇岛市第二医院，河北 昌黎 066600)

坤泰胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松防治效果的实验研究

徐 静，孙建新

(河北省秦皇岛市第二医院，河北 昌黎 066600)

[摘要]目的 研究坤泰胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松的防治效果，旨在为科学用药提供依据。方法 随机取60只4月龄雌性大鼠，10只大鼠作为假手术组，50只大鼠进行去卵巢造模。术后4周将建模成功的50只雌性SD大鼠随机分成模型组、坤泰胶囊低剂量组、坤泰胶囊中剂量组、坤泰胶囊高剂量组及仙灵骨葆胶囊组，每组10只。假手术组及模型组灌胃等容积的蒸馏水，坤泰胶囊低、中、高剂量组以及仙灵骨葆胶囊组分别灌胃坤泰胶囊1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg及仙灵骨葆胶囊2.0 g/kg，1次/d，连续12周。观察各组大鼠体质量、骨密度以及血清骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平。结果 坤泰胶囊中、高剂量组的体质量及血清骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平均明显低于模型组(P均<0.05)，骨密度值显著高于模型组(P均<0.05)。各指标与仙灵骨葆胶囊组相当。结论 中、高剂量坤泰胶囊可以有效增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度值，降低血清骨碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平，是治疗绝经后骨质疏松症的有效药物。

绝经后；骨质疏松；大鼠；坤泰胶囊；骨密度

骨质疏松症属于代谢性骨病，在中老年人中十分常见，尤其是绝经后妇女，因为女性的运动量本身较小，加之从食物中摄取钙的量不足，在绝经后的3～5年就会出现钙质丢失的情况，据统计平均每年丢失2.5%左右[1-2]，继而可引发骨质疏松症。有关研究显示，60岁以上绝经妇女发生骨质疏松症的概率在40%以上[3]，这种高发风险要远远超过同龄男性，可见绝经后妇女是骨质疏松症的高危人群。尽管骨质疏松症不会直接造成患者死亡，但骨折的危害却时刻威胁着人们的健康，同时致残率高，医疗费用较高，均会给患者带来较大的负担[4-5]。目前雌激素疗法是防治绝经后骨质疏松症的方法之一，不仅可以缓解绝经症状，还可以减少阴道炎及干涩情况，同时可降低冠心病的发生率，但是雌激素的大量使用会增加心脑疾病以及静脉血栓等疾病的风险，在临床应用中受到制约[6]。因此开发出安全可靠的防治绝经后骨质疏松症的方法及药物是目前研究的重要课题。笔者观察了中药坤泰胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治效果及其机制，旨在为临床治疗骨质疏松症提供更加有力的科学依据。

1 实验资料

1.1药物 坤泰胶囊，贵阳新天药业股份有限公司提供，国药准字Z20000083，规格：0.5 g/粒，实验时加入蒸馏水配置成混悬液以方便使用。仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药公司提供，国药准字Z20025337，规格：0.5 g/粒，实验时加入蒸馏水配置成混悬液以便使用。青霉素钠，华北制药公司提供，批号：0612117，使用前以0.9%氯化钠溶液稀释成40万IU/mL药液以待用。戊巴比妥钠，佛山化工实验厂提供，使用前以0.9%氯化钠溶液稀释成0.01 g/mL溶液以待用。

1.2试剂与仪器 南京建成生物研究所提供的大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒以及大鼠骨碱性磷酸酶试剂盒，北京九强生物科技公司提供的血清磷检测试剂盒及血清钙检测试剂盒，血清雌二醇检测试剂盒由美国贝克曼公司提供。上海安泰分析仪器公司提供的全自动生化分析仪、双能双光子骨密度仪以及自动酶标分析仪(AT-858型号)，美国贝克曼公司的全自动微粒子化学发光免疫分析仪等。

1.3实验动物 4月龄的雌性SD大鼠60只，体质量(282±20)g，由成都中医药大学实验动物研究所提供，实验动物生产合格证号：川实动管质(04)第11号；实验室温度18～25 ℃，相对湿度40%～70%，具备全套的排气通风设备，保证充足自然光照，做好鼠笼的定期消毒以及更换。

1.4造模及分组 随机取10只大鼠作为假手术组，其余动物进行去卵巢造模。具体方法：使用45 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，取腹位固定，在最末肋骨下，选择腋中线与脊柱外侧距离1 cm的交叉位置去除鼠毛，用络合碘消毒处理后，切开皮肤、背部肌肉及腹膜，将脂肪团轻轻拉开分离后暴露出卵巢，结扎卵巢下端输卵管后将卵巢摘除，然后逐步分层缝合切口，同样方法摘除另一侧卵巢。假手术组大鼠只取其一小块脂肪，不摘除卵巢，其余操作与模型大鼠相同。术后均予以肌肉注射青霉素钠，连续1周，并应用络合碘对伤口进行消毒处理。术后4周将造模成功大鼠随机分为模型组10只、坤泰胶囊低剂量组10只、坤泰胶囊中剂量组10只、坤泰胶囊高剂量组10只、仙灵骨葆胶囊组10只。假手术组及模型组灌胃等容积的蒸馏水，坤泰胶囊低、中、高剂量组以及仙灵骨葆胶囊组分别灌胃坤泰胶囊1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg及仙灵骨葆胶囊2.0 g/kg，1次/d，连续12周，每周称量1次体质量并以此为依据调整灌胃用量。

1.5检测指标 用药12周后，使用戊巴比妥钠麻醉大鼠，仰卧位置于测试台，使用双能双光子骨密度仪检测全身以及脊柱的骨密度值；然后取股动脉不抗凝血约3 mL，常规分离血清，使用免疫酶联法测定血清水抗酒石酸酸性磷酸酶与骨碱性磷酸酶水平。

2 结 果

2.1各组大鼠用药前后体质量比较 用药12周后，模型组大鼠的体质量明显高于假手术组(P<0.05)；坤泰胶囊中、高剂量组的体质量显著低于模型组(P均<0.05),但与假手术组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠用药前后体质量比较

注：①与模型组比较，P<0.05。

2.2各组大鼠骨密度值及血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b、骨碱性磷酸酶水平比较 模型组大鼠骨密度值明显低于假手术组(P<0.05)，血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b及骨碱性磷酸酶水平明显高于假手术组(P<0.05)；坤泰胶囊中、高剂量组大鼠骨密度值明显高于模型组(P均<0.05)，血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b以及骨碱性磷酸酶水平明显低于模型组(P均<0.05)，各指标与假手术组及仙灵骨葆胶囊组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

3 讨 论

绝经后骨质疏松症多发生于妇女绝经后的5～20年，在早期表现并不十分特殊，只有在患者发生骨折时才会被发现。因为绝经后，女性体内的雌激素水平显著降低，促进了破骨细胞的增长，同时在正常的代谢活动中，随着对破骨细胞的吸收，其形成也在快速增加，因此绝经后女性的成骨细胞数量与之前比较要明显减少，功能作用也随之降低，故如何防治骨质疏松症仍旧是目前主要研究课题[7]。

祖国医学对绝经后骨质疏松症早有一定的认知，该病属于祖国医学中“肾精不足”“骨痰”“骨枯”“骨痹”等范畴，从祖国医学整体概念中可以发现，绝经后骨质疏松症是伴随着机体衰老以及顺应性下降的一种退行性骨病，是由诸多因素造成的[8]，临床中可以从肾虚血癖这一病机上着手治疗。坤泰胶囊是从《伤寒论》当中的黄连阿胶汤化裁而来，由黄连、白芍、熟地黄、茯苓、阿胶等组成，方中君药为熟地黄，臣药为阿胶、白芍及黄连，佐药则为茯苓，可以起到安神、滋阴养血之效，方中熟地黄味甘且性温，归肝肾经，是补肾益血的上品，可生精填髓、养补肝肾、强益肾精，从而达到强壮筋骨的目的，肾精充沛则可养骨充髓。黄连清热燥湿，泻火解毒；白芍养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗；阿胶滋阴、补血、止血、润燥；清热燥湿、止血、安胎；茯苓渗湿利水，健脾和胃，宁心安神。诸药与熟地黄配伍，起到改善卵巢功能的作用。

表2 各组大鼠骨密度值及血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b、骨碱性磷酸酶水平比较

注：①与模型组比较，P<0.05。

去卵巢骨质疏松症模型是目前研究绝经后骨质疏松的最重要模型之一，该模型能够最大限度模拟出绝经后骨质疏松症的骨代谢情况，同时也非常适合坤泰胶囊的给药方式，因为该药在临床应用中多是针对已经发现的骨质疏松症患者，隶属于治疗药物，因此该模型是最佳选择之一。在检测指标上，笔者考虑到实验大鼠并无进行性骨质减少的脆性骨折发生，因此选择了骨密度这一黄金指标作为判断骨质疏松症的指标之一；同时在骨代谢相关的生化指标中，选择了血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b作为反映骨吸收的指标，血清骨碱性磷酸酶作为反映骨转换及形成的指标。抗酒石酸酸性磷酸酶常见于破骨细胞中，而在成骨细胞中十分少见，一旦骨吸收时，抗酒石酸酸性磷酸酶则被释放到血液循环当中，因此其水平可以反映骨吸收情况。骨碱性磷酸酶主要由成骨细胞生成，一般在发生骨化后的软骨组织中可见，在骨形成的过程中，骨细胞功能及数量有所递增的同时会表现出骨碱性磷酸酶活性的升高[9-11]。因为其能够加快无机磷酸盐的水解过程，从而降低焦磷酸盐浓度，因此在骨矿化的过程中发挥着重要作用。

本研究结果发现，坤泰胶囊中、高剂量组骨密度值明显高于模型组，体质量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b与骨碱性磷酸酶水平均明显低于模型组。提示坤泰胶囊可以明显调节去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度值，促进其恢复正常水平，同时能够更好地平衡破骨及成骨的作用，是治疗绝经后骨质疏松症的有效药物。

[1] 谢雁鸣,宇文亚,董福慧,等. 原发性骨质疏松症中医临床实践指南(摘录)[J]. 中华中医药杂志,2012,27(7):1886-1890

[2] 张国山，邱冉冉，刘密，等. 针药结合对绝经后骨质疏松症患者生殖内分泌激素及骨代谢的影响[J]. 中华中医药杂志，2014,29(6)：1852-1854

[3] 刘海全,秦佳佳. 淫羊藿含药血清对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成脂分化PPARγ、mRNA表达的影响[J]. 北京中医药大学学报,2012,35(9):611-614

[4] 李国瑛,唐慧,童琴,等. 针灸加桂枝茯苓汤加味治疗绝经后骨质疏松症的临床观察[J]. 中国骨质疏松杂志,2012,18(2):168-170

[5] 甘宁，戴燚. 血清基质金属蛋白酶-13对绝经后骨质疏松骨密度和骨代谢的影响[J]. 中国中医骨伤科杂志，2014，22(4)：19-23

[6] Budhia S，Mikyas Y，Tang M，et al. Osteoporotic fractures: a systematic review of U．S． healthcare costs and resource utilization[J]. Pharmacoeconomics，2012，30(2):147-170

[7] Armas LA，Recker RR. Pathophysiology of osteoporosis: new mechanistic insights[J]. Endocrinol Metab Clin North Am，2012，41(3):475-486

[8] 陈蓉，林守清，杨欣，等. 坤泰胶囊与戊酸雌二醇对更年期综合征各种症状的不同疗效分析[J]. 医学综述，2013,19(10)：1869-1872

[9] Khosla S，Oursler MJ，Monroe DG. Estrogen and the skeleton[J]. Trends Endocrinol Metab，2012，23(11):576-581

[10] Reginster JY，Kaufman JM，Goemaere S，et al. Maintenance of antifracture efficacy over 10 years with strontium ranelate in postmenopausal osteoporosis[J]. Osteoporos Int，2012，23(3):1115-1122

[11] Bertram M，Norman R，Kemp L，et al. Review of the long-term disability associated with hip fractures[J]. Inj Prev，2011，17(6):365-370

Experimental study on the effect of prevention and treatment of Kuntai capsule on osteoporosis in ovariectomized rats

XU Jing, SUN Jianxin

(The Second Hospital of Qinhuangdao, Qinhuangdao 066600, Hebei, China)

Objective It is to study the effect of prevention and treatment of Kuntai Capsule on osteoporosis in ovariectomized rats,in order to provide a basis for scientific use.Methods Ten 4 months old female rats were randomly selected as sham operation group, another 50 rats were selected to establish ovariectomized models. In 4 weeks after the operation, the successful models of 50 rats were divided into model group, low, medium and high dose of Kuntai capsule groups and Xianlinggubao capsule group, each group had 10 rats. The sham operation group and model group was given the same volume of distilled water by intragastric administration, low, medium and high dose of Kuntai capsule groups and Xianlinggubao capsule group was respectively treated with Kuntai capsule 1.0 g/kg, 2.0 g/kg, 4.0 g/kg and Xianlinggubao capsule 2.0 g/kg by intragastric administration once per day and for 12 weeks. Bone density, body mass, and the levels of serum biochemical markers of bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b of the rats in every group were observed.Results Body mass and the levels of serum bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b in Xianlinggubao capsule group and medium and high dose of Kuntai capsule groups were significantly lower, while bone density was higher than those in the model group (P<0.05), and the changes of these indexes were similar in Xianlinggubao capsule group and medium and high dose of Kuntai capsule groups. Conclusion Medium and high dose of Kuntai capsule can effectively increase bone density, decrease the levels of serum bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b, so it is the effective drug for the treatment of postmenopausal osteoporosis.

postmenopausal; osteoporosis; rat; Kuntai Capsule; bone mineral density

徐静，女，副主任医师，从事妇科临床工作。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.26.007

R-332

A

1008-8849(2015)26-2873-03

2015-01-09