杨季萍 肖玉鹏 罗志粦 曾奋 许黎娟

慢性丙型肝炎患者血清肿瘤坏死因子-α水平与病变程度、病毒学指标、抗病毒治疗
应答效果之间的相关性研究

杨季萍 肖玉鹏 罗志粦 曾奋 许黎娟

目的 探讨慢性丙型肝炎患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平与病变程度、病毒学指标、抗病毒治疗应答效果之间的相关性。方法 选择50例慢性丙型肝炎患者作为观察组(分为轻度组18例、中重度组22例、肝硬化组6例和肝癌组4例)和50例健康对照者(对照组), 分别于干扰素治疗前后进行TNF-α、谷丙转氨酶(ALT)水平和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量的测定, 并进行统计分析。结果 观察组各组ALT、TNF-α水平比较差异具有统计学意义(P<0.01)；观察组各组HCV-RNA对数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组各组TNF-α、ALT水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)；观察组各组HCV-RNA水平与轻度组比较差异均有统计学意义(P<0.05)；HCV-RNA含量对数值与ALT水平和TNF-α含量无显著相关性, 但ALT水平与TNF-α含量呈正相关(r=0.342, P<0.05)。结论 不同程度慢性丙型肝炎患者TNF-α和ALT水平存在差异, ALT水平与TNF-α含量呈正相关, TNF-α水平可用于评价干扰素治疗对机体免疫状态的影响。

慢性丙型肝炎；肿瘤坏死因子-α；干扰素；丙型肝炎病毒核糖核酸；谷丙转氨酶

丙型肝炎是由HCV引起的能够严重危害人类健康的疾病, 大部分患者在疾病进展的最终发展为肝癌和肝硬化。在丙型肝炎慢性化和肝损伤的机制、诊断和预后的判断中, 细胞因子的测定具有很重要的参考价值［1］。TNF-α是一种由单核巨噬细胞合成并释放的活性作用较为广泛的细胞因子, 可诱导各类细胞进行增殖分化, 并且在肝脏纤维化启动和炎性反应中具有很重要的作用, 同时TNF-α还能够诱导淋巴细胞产生白细胞介素-2(IL-2)、IL-6、IL-12和干扰素-α(IFN-α)等, 导致肝脏内出现大量细胞因子, 进而形成细胞因子网络活化, 促使肝脏内发生炎性反应, 导致肝细胞损伤, 参与肝脏炎性变化和肝癌的发生发展［2］。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择2011年12月~2014年12月本院确诊住院的慢性丙型肝炎患者50例作为研究对象(观察组), 其中男27例, 女23例, 年龄24~71岁, 平均年龄(49.8±13.6)岁,入选标准符合2000年9月中华医学会传染病和寄生虫病学分会肝病分会西安会议对HCV感染者诊断的标准, 按照其临床诊断分为：轻度组18例, 中重度组22例, 肝硬化组6例,肝癌组4例。排除严重肾功能异常患者、乙型肝炎患者、自身免疫性肝炎患者、酒精性肝炎患者、孕妇及哺乳期妇女等。另选择本院体检中心同期健康体检者50例作为对照组, 其中男29例, 女21例, 年龄28~69岁, 平均年龄(48.3±16.8)岁。各组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 实验方法 TNF-α的测定采用西门子IMMULITE1000化学发光法检测, 试剂盒购自西门子公司。血清ALT水平的测定采用东芝TBA-2000FR全自动生化分析仪进行测定, 试剂盒为北京利德曼公司生产。HCV IgG血清抗体的测定采用ELISA法, 试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供。病毒载量的测定在ABI-7300荧光定量PCR检测仪上进行。患者于清晨采集空腹静脉血, 室温下静置30 min, 3000 r/min离心10 min后分离血清备用。

1. 2. 2 治疗方法 观察组患者入院后均行基础护肝治疗,然后应用基因重组α-2b干扰素(安福隆, 天津华利达生物公司, 国药准字S10970077)进行抗病毒治疗, 300万单位肌内注射, 1次/d, 治疗14 d后改为隔日1次, 连续治疗6个月,采集治疗前及治疗6个月后血液样本, 统一进行检测。

1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验；多级比较采用方差分析；相关性分析采用直线相关性分析, 相关系数用r表示。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 各组ALT、TNF-α和HCV-RNA水平比较 观察组各组ALT水平比较差异具有统计学意义(F=0.981, P<0.01)；观察组各组TNF-α水平比较差异具有统计学意义(F=14.69, P<0.01)；观察组各组HCV-RNA对数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组各组TNF-α水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(t=6.596, 9.857, 6.673, 8.358；P<0.01)；观察组各组ALT水平均显著高于对照组, 差异有统计学意义(t=12.031, 6.610, 3.971, 6.857, P<0.01)；观察组各组HCVRNA水平与轻度组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。将HCV-RNA含量对数值与患者ALT水平、TNF-α含量进行相关性分析, 结果显示HCV-RNA含量对数值与ALT水平和TNF-α含量无显著相关性, 但ALT水平与TNF-α含量呈正相关(r=0.342, P<0.05)。见表1。

2. 2 慢性丙型肝炎患者治疗前后血清TNF-α水平比较 各组TNF-α水平与治疗前比较均显著降低, 差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 各组ALT、TNF-α和HCV-RNA水平比较（±s)

表1 各组ALT、TNF-α和HCV-RNA水平比较（±s)

注：与对照组比较, a P<0.01；观察组各组ALT、TNF-α比较, P<0.01；与轻度组比较, b P<0.05

组别 例数 ALT(U/L) TNF-α(pg/ml) HCV-RNA(copies/ml) lgHCV-RNA轻度组 18 51.68±10.66a 32.62±21.64a 2.11+07E±2.88+07E 7.01±0.63中重度组 22 105.64±60.61a 35.26±15.61a 3.45+06E±4.99+06Eb 6.04±0.71肝硬化组 6 100.32±88.94a 37.61±2.61a 2.69+06E±2.00+06Eb 6.23±0.64肝癌组 4 125.36±66.51a 34.33±18.31a 2.21+06E±2.62+06Eb 5.77±1.04对照组 50 18.62±5.35 2.31±1.31

表2 慢性丙型肝炎患者治疗前后血清TNF-α水平比较（±s, pg/m l)

表2 慢性丙型肝炎患者治疗前后血清TNF-α水平比较（±s, pg/m l)

注：与治疗前比较, a P<0.05

组别 例数 治疗前 治疗后观察组 50 35.49±2.99 24.71±2.85a完全应答组 18 30.31±3.88 21.66±1.35a部分应答组 16 35.69±2.81 24.99±2.21a无应答组 16 42.37±4.98 28.01±1.66a对照组 50 2.31±1.31 -

3 讨论

近年来, 诸多研究表明HCV-RNA含量、ALT水平与肝损伤有显著相关性, HCV复制活跃时引起肝损伤和ALT水平升高, HCV-RNA定量与ALT水平呈正相关［3］。本研究中, HCV-RNA含量与ALT水平无显著相关性, 这提示HCVRNA含量与疾病的程度可能无显著相关, HCV-RNA含量可能与肝组织炎性程度和病程的进展无水平相关, 病毒复制导致的免疫损伤和直接损伤有很大的个体差异。这可能与HCV感染机体时免疫状态和肝组织的损伤有关, 免疫力较高者造成的病理损伤较重, 免疫力低下者造成的病理损伤较轻,因此免疫功能发生紊乱才是肝损伤的重要因素［4］。

机体感染HCV后, 免疫系统激活, 导致单核细胞合成并释放TNF-α, 同时HCV病毒产生的内毒素-免疫复合物也能够促使机体产生大量TNF-α, 而单核细胞具有的自分泌调节机制在TNF-α大量分泌的情况下进行有效调节诱导更多的TNF-α释放。TNF-α又能够激活T、B淋巴细胞、NK细胞和单核细胞参与病毒感染而改变肝细胞膜成分免疫应答, 造成肝细胞坏死和肝功能改变。本研究发现TNF-α水平与ALT水平呈正相关, 这可能是因为TNF-α2238启动子A等位基因与ALT水平高度相关［5］。

本研究中, 治疗前后慢性丙型肝炎患者TNF-α水平均有显著降低, 再一次从临床角度证实了TNF-α在肝脏损伤中起到的重要炎性介质作用。

［1］ Gramenzi A, And reone P, Loggi E, et al. Cytokine profile of peripheral blood mononuclear cells from patients with different outcomes of hepatitis C virus infection. J Viral Hepat, 2005, 12(5):525.

［2］ Murata K, Yamamoto N, Kawakita T, et al. Up- regulation of IL- 18 by interferon alpha- 2b/ribavirin combination therapy induces an anti- viral effect in patients with chronic hepatitis C. Hepatogastroenterology, 2005, 52(62):547.

［3］ Par G, Berki T, Palinkas L, et al. Immunology of HCV infection: the causes of impaired cellular immune response and the effect of antiviral treatment. Orv Hetil, 2006, 147(13):591- 600.

［4］ Mao XR, Yuan H. Genetic association of tumor necrosis facor-alpha polymorphisms with hepatitis C virus infection. Nical Focus, 2007, 22(6):389-392.

［5］ Leone N, Rizzetto M. Natural history of hepatitis C virus infection: from chronic hepatitis to cirrhosis, to hepatocellular carcinoma. Minerva Gastroenterol Dietol, 2005, 51(1):31-46.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.018

351100 福建省莆田市第一医院

2015-04-29］