丁 苏，李 献，李 玮，毕方方，林 玲，韦俏娜，张 瑛

（1.广西大学行健文理学院，广西南宁530004；2.广西壮族自治区农业科学院葡萄与葡萄酒研究所，广西南宁530007）

长枝木霉原生质体制备及再生条件研究

丁 苏1，李 献1，李 玮2，毕方方1，林 玲2，韦俏娜1，张 瑛2*

（1.广西大学行健文理学院，广西南宁530004；2.广西壮族自治区农业科学院葡萄与葡萄酒研究所，广西南宁530007）

研究优化了长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）JK-15菌株菌丝体制备原生质体细胞及再生的条件。通过单因素试验和正交试验对影响原生质体形成和再生的菌龄、破壁酶组成、酶解反应温度及时间、渗透压稳定剂等因素进行了筛选优化。结果表明，长枝木霉菌株JK-15的最适条件为菌丝体菌龄18 h，混合酶组成配比为1.5%蜗牛酶∶1.5%纤维素酶∶0.1%溶壁酶，酶解条件为30℃条件下酶解2.5 h，原生质体制备过程中渗透压稳定剂为0.7 mol/L山梨醇，原生质体再生培养基中渗透压稳定剂为0.7 mol/L蔗糖，实验结果为长枝木霉JK-15的育种工作奠定了良好的技术基础。

长枝木霉；原生质体；生物防治；育种

木霉（Trichodermaspp.）是一类具有较强生物防治功效的丝状真菌，其具有生长迅速、能分泌多种抑菌物质、能够对植物病原菌进行重寄生等生理特性，因而在国内外被广泛的用于多种植物病害的生物防治研究[1-3]。但在实际的农业生产应用过程中，大多数木霉菌均会表现出最适温度区间较小、定殖能力不稳定、抑菌广谱性较差等不足。为了解决这些问题，研究人员一方面不断努力从自然界中筛选更优良的野生菌株，另一方面也在尝试通过微生物育种的方法改良现有菌株[4-7]。……