PCR假阳性的原因分析及控制措施
2015-01-24南文龙张悦勇陈义平
中国动物检疫 2015年8期
南文龙,张悦勇,陈义平
(中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032)
PCR假阳性的原因分析及控制措施
南文龙,张悦勇,陈义平
(中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032)
近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍关注的问题。本文分析了PCR假阳性形成的原因,提出预防及控制措施,为促进实验室PCR实践工作提供参考。
PCR;假阳性;原因分析;控制措施
PCR是一种快速、敏感的分子检测方法,通过使用特定的引物,将微量的模板DNA在DNA聚合酶作用下进行指数扩增,再对扩增放大后的“信号”进行识别,大大提升了对病原微生物的检测能力。各省、市级动物疫病防控机构及规模化养殖企业普遍配置PCR仪,PCR技术已广泛应用于检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控工作。
假阳性是指检测阴性样品时,得出阳性结果。PCR技术具有较高的敏感性,这是其突出的优势,但也容易出现假阳性,被检样品即使污染了微量的模板核酸,也会被检测为阳性。1988年,Lo等[1]首次报道了PCR假阳性,在检测HBV过程中,由于PCR引物污染了含有HBV全长基因的质粒,导致检测时出现假阳性。在PCR检测中,如何有效避免假阳性、控制并去除潜在的风险,一直是研究者普遍关注的问题。本文拟分析讨论PCR假阳性形成的原因,提出预防及控制措施,为促进实验室PCR实践工作提供参考。……
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