王建刚

胶体金法检测粪便隐血试验假阴性的原因与应对方法的探讨

王建刚

粪便隐血试验是检测消化道出现最常用的初筛方法。胶体金法是目前应用最广泛的检测粪便隐血试验的方法, 其灵敏度高且特异性好。但因其反应原理与患者样本的复杂性会出现假阴性的结果, 分析产生的原因并实施应对方法, 可以有效的完善粪便隐血试验的室内质量控制, 为临床提供准确的结果。

粪便隐血；胶体金法；假阴性

粪便隐血试验是临床检验项目中最常用的项目, 是消化道出血检查项目中最简便与经济的初筛试验, 在诊断消化道肿瘤时, 往往可以给予临床早期提示。粪便隐血试验的方法常用的有化学法与免疫法。传统的化学法简单易行, 但受缺乏特异性、干扰因素多、假阳性率高等方面的限制, 最近几年免疫学方法已经获得较为广泛的应用。免疫学方法具体有胶体金标记夹心免疫检验法、反向间接血凝法、放射免疫扩散法、胶乳免疫化学凝聚法、免疫斑点法、酶联免疫吸附试验免疫单抗法等几种类型, 这些类型的试验主要分成抗人红细胞基质、抗人血红蛋白等两种不同的抗体, 双抗体夹心胶体金显色技术通过多克隆以及单克隆等方式, 能够采取试纸条一步法将便隐血测出, 具有快速、简单等优势, 不管是对胃液、尿液或者是粪便等标本的检测, 其特异性以及灵敏度均相对较高, 且不受饮食的影响, 已逐渐取代化学法成为目前检测粪便隐血的主要方法［1］。但在临床实际应用中, 免疫学的胶体金法也会出现假阴性的结果。因此对假阴性结果进行分析, 有利于更好的进行粪便隐血试验室内质量控制。

1 胶体金法检测粪便隐血的检测原理

胶体金法对粪便隐血进行检测主要是以双抗体夹心法为主要试验原理, 通过抗人血红蛋白多克隆抗体以及单克隆抗体等方式, 特异性的结合粪便中存在的人血红蛋白指标, 通过胶体金标记测定抗人血红蛋白的抗体显色情况, 最低可检测出0.2 μg/m l的血红蛋白, 能准确检测无症状、少量、持续、肉眼和显微镜下看不到的出血, 并且不受动物血和铁剂的影响, 世界卫生组织胃肠镜协会认为, 粪便隐血试验具有较高的准确性, 值得临床推广应用［2］。化学法检测粪便潜血主要是通过血红蛋白中亚铁血红素有催化过氧化物分解为基本原理, 催化设计中有释放新生态氧、过氧化氢分解等, 对各类型的色原物质氧化后则呈色, 血红蛋白的量主要是通过呈色的深度或者浅度进行反应。但缺乏特异性和准确性, 外源性动物食品、大量生食蔬菜等易出现假阳性反应, 而维生素C或其他具有还原作用的药物使隐血试验假阴性, 因此患者检测前需控制饮食或药物。

2 胶体金法检测粪便隐血出现假阴性的原因

胶体金法通过充分发挥单克隆和多克隆抗体特异性来检测粪便标本当中的人血红蛋白, 具有特异性高、灵敏度高、操作简单快速、不受其他药物、铁剂、动物血、饮食限制等干扰的优点。然而临床应用中发现该检测方法存在部分缺陷:当血红蛋白的抗原性改变时, 与抗体结合可能发生异常,呈现假阴性;当患者出血量比较大时, 增高血红蛋白的含量,检测时可能因抗原过剩出现钩状效应, 呈现假阴性;当血红蛋白长时间存在于消化道时, 分泌的酶降解则会在一定程度上破坏肠道以及胃酸, 呈现假阴性。

这种方法的灵敏度较高, 但亦可造成一定的假阴性结果。在实际的免疫反应中, 检测样本中血红蛋白含量过高(>30000 μg/ml)或过低 (<0.03 μg/ml)时 , 试验结果以阴性呈现。在血红蛋白含量处于3~300 μg/ml的范围时, 才以强阳性反应呈现［3］。假阴性产生的主要原因有以下几个方面：抗原过少或过多、抗原性发生改变、抗原抗体不匹配。抗原过少是因为采样量不足或稀释液用量控制不严格而造成的。抗原过多是因为采样量过多或过量大出血而致反应体系中抗原过剩出现后带现象引起的, 通常情况下, 柏油样便主要是由于上消化道出血引起的, 一旦粪便标本中血红蛋白有着过高的含量, 则会导致隐血试验以假阳性检测结果或者弱阳性检测结果呈现［3］。抗原性发生改变是有些患者上消化道出血后, 胃部存在血红蛋白后, 则会在较快的时间内水解珠蛋白链, 血红蛋白可能被充分降解或消化殆尽而失去单克隆抗体所特异结合的抗原决定簇, 另外, 肠道内存在的体外细菌能够促进血红蛋白免疫活性在粪便中逐渐丧失, 造成出现假阳性的情况。另外, 还出现患者由于单克隆抗体、血红蛋白无法匹配出现假阴性的情况, 同时由于水触珠蛋白、糖化血红蛋白屏蔽抗原决定簇而出现假阳性的检验结果［4］。

在关注胶体金法检测粪便隐血可能出现假阴性的同时,也要注意可能出现假阳性的情况, 健康人胃肠道生理出血量在0.6 m l/d内, 因为生理失血属于正常情况, 加上免疫学方面敏感性较高, 一般健康人在服用对胃肠道产生刺激的药物后, 可导致假阳性结果。

3 避免胶体金法检测粪便隐血出现假阴性可采取的措施

选用合格的、质量好及灵敏度高的商品试剂。制订完善标准操作规程并严格执行。操作中应多点采样, 尤其是外观未见异常的样本。应该严格控制标本采样量, 以10 mg/ml为宜, 严格控制蒸馏水用量, 以1 ml为宜, 并在说明书标识的反应时间内观察结果。倘若柏油样便或者黑便的检测结果以阴性结果呈现, 那么应该将采集量减少, 同时进行多次稀释,以确保检测结果为阳性, 倘若多次稀释后仍然为阴性, 应该加用化学法检测, 将免疫和化学法相结合联合检测便潜血［5］,避免免疫法的假阴性出现遗漏的情况, 同时应该及时告知临床主治医生, 防止患者疾病治疗受到影响, 并且应该观察患者用药以及饮食等, 防止因为进食动物血或服用中药、铁剂等药物而出现黑便。

［1］叶应抚, 王毓三, 申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.广州:东南大学出版社, 2006:310.

［2］孙彩林, 袁明凤.邻联甲苯胺法和单克隆抗体法检测粪便隐血的应用评价.检验医学与临床, 2011, 8(20):2527.

［3］思凌云, 王刚, 王凌, 等.免疫金标法粪便隐血试验的质量控制.现代检验医学杂志, 2003, 18(4):47-48.

［4］王志强.胶体金试纸条法检测粪便隐血方法评价.九江医学,2007, 22(2):37-38.

［5］赵海英.胶体金法检测便潜血假阴性结果分析.中国医学检验杂志, 2006, 7(6)422-423.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.177

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2015-01-22］