APP下载

高效液相色谱法测定艾附暖宫丸中芍药苷和阿魏酸的含量

2015-01-19李洪亮

中国医药导报 2015年36期
关键词:川芎白芍芍药

李洪亮 乔 静,2▲

1.湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室,湖北十堰 442000;2.湖北医药学院药学院,湖北十堰 442000

艾附暖宫丸是市售非处方妇科用药,该药被《中国药典》2015 年版一部收载, 处方被 《仁斋直指附遗》、《回春》、《女科切要》、《古今医鉴》 等多部古医书记载,由艾叶(炭)、醋香附、制吴茱萸、肉桂、当归、川芎、白芍(酒炒)、地黄、炙黄芪和续断等组成。 具有理气补血、调经止痛、温暖子宫的功效。 用于血虚气滞、下焦虚寒所致的月经不调、痛经等症[1],是治疗因寒凝而致的月经不调、小腹疼痛、经血量少、久无子息等病症的代表方剂[2]。芍药苷、阿魏酸是白芍、当归、川芎的主要有效成分。 目前市售艾附暖宫丸的规格较多,相关质量控制研究文献报道较少[2-5],丁华[6]调查了市售36 批艾附暖宫丸,结果显示合格率只有97%,并得出结论,其质量标准还需进一步完善和提高。 艾附暖宫丸处方组成复杂,《中国药典》2015 年版一部该药项下规定检测本品芍药苷的含量,专属性较差,难以评价全面质量。目前,高效液相色谱已经普及,同时测定两种或以上成分的方法已广泛应用于中药饮片、提取物及制剂质量控制[7-9]。处方中当归、川芎、白芍均为君药,基于此,本实验使用高效液相色谱法同时快速测定本品中芍药苷、阿魏酸含量,能够更好地控制制剂的质量。

1 仪器与试药

SHIMADZU LC-20A 高效液相色谱仪 (LC-20AD泵,SPD-M20A 检测器,SIL-20A 自动进样器,吉尔森TC-100 柱温箱,LCsolution 色谱工作站);FA-2004 电子分析天平(上海天平仪器厂);KQ3200 超声波清洗仪(江苏昆山超声波仪器厂);艾附暖宫丸(天津天士力公司,9 g×14 袋/盒,批号:20140318;北京同仁堂股份有限公司同仁堂制 药厂,6 g×10 袋/盒, 批 号:1035034;山西华康药业股份有限公司,9 g×10 丸/盒,批号:20110501;内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司,4 g×6 袋/盒,批号:20130632);芍药苷对照品、阿魏酸对照品均来自中国食品药品检定研究院 (批号分别为:120903-200809,0773-9910);乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的芍药苷、阿魏酸对照品适量,加50%乙醇稀释成每毫升溶液中芍药苷430 μg、阿魏酸489.6 μg 的储备液备用。2.1.2 供试品溶液的制备 取艾附暖宫丸, 小丸碾碎,取2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入20 mL 50%乙醇,精密称定重量,超声处理40 min,放冷,补足重量, 转移至20 mL 玻璃离心管中,3000 r/min 离心5 min,取上清液,0.45 μm 微孔滤膜滤过,即得。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 按处方工艺制备不含白芍、当归和川芎的阴性样品,按“2.1.2”项下条件制备,即得。

2.2 色谱条件

色谱柱:Sinochrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温30℃,流动相:乙腈:0.03 mol/L 醋酸铵(含0.25%甲酸)(13∶87),流速:0.9 mL/min,检测波长为230~321 nm,进样量:10 μL。在此色谱条件下芍药苷、阿魏酸同杂质峰的分离度大于1.5, 且阴性样品溶液在相应保留时间无干扰。 结果见图1。

2.3 测定方法

精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10 μL,分别注入高效液相色谱仪,测定峰面积,以回归方程计算样品中芍药苷、阿魏酸的含量。

2.4 线性关系考察

图1 标准品溶液(A)、样品溶液(B)、阴性样品溶液(C)的HPLC 色谱图

取芍药苷标准储备液适量,用50%甲醇溶液稀释成5.2、10.4、20.8、31.2、41.6 μg/mL 的溶液,10 μL 注入色谱仪,以浓度为纵坐标(Y),峰面积为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程:Y=2.388 173×10-5X-8.639 89,r=0.998 32,表明芍药苷在5.2~41.6 μg/mL 浓度范围内线性关系良好; 另取阿魏酸标准储备液适量,用50%甲醇溶液稀释成0.489、0.979、1.958、2.937、3.916 μg/mL 的溶液,10 μL 注入色谱仪,以浓度为纵坐标(Y),峰面积为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程:Y=2.79 451×10-7X-6.070 66×10-2(r=0.999 716);表明阿魏酸在0.489~3.916 μg/mL 浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

分别精密吸取芍药苷、阿魏酸对照品溶液各10 μL,连续进样5 次,测定芍药苷、阿魏酸峰面积积分值,结果芍药苷的RSD 为1.32%, 阿魏酸峰面积的RSD 为0.38%,结果表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取“2.3”项下制备的样品溶液(山西华康药业股份有限公司,9 g×10 丸/盒,批号:20110501)5 份,进样10 μL,以回归方程计芍药苷、阿魏酸的含量,平均含量分别为22.37、2.38 μg/mL,RSD 分别为1.23%和0.98%,表明重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一批样品的供试品溶液分别在1、2、4、6、12、24 h 进样,供试品溶液在24 h 内基本稳定,6 次测定芍药苷、阿魏酸面积的RSD 分别为0.85%、1.23%,表明该溶液在24 h 内基本稳定。

2.8 回收率试验

精密称取同一批号(天津天士力,9 g×14 袋/盒,批号:20140318)的艾附暖宫丸0.2 g,分别加入芍药苷、阿魏酸对照品储备液适量, 使溶液中加入芍药苷的含量为5、10、20 μg/mL;阿魏酸的含量为1.0、1.5、2.0 μg/mL。 按“2.1.2”项下方法处理,进样10 μL,计算加样回收率,结果见表1~2。

表1 芍药苷加样回收率实验结果(n =9)

表2 阿魏酸加样回收率实验结果(n =9)

2.9 样品含量测定

对4 批艾附暖宫丸进行含量测定以回归方程计算含量,结果见表3。

表3 样品含量测定(n = 3)

3 讨论

《中国药典》2010 年版记载艾附暖宫丸功效为理气养血,暖宫调经。《黄帝内经·素问·举痛论》指出“通则不痛,痛则不通”,其是用于气滞、寒凝、湿热淤阻所致子宫血气运行不畅[10]。 艾附暖宫丸以理气补血、温经散寒、暖宫活血为主[11],组方中黄芪、当归、生地黄、白芍、川芎具有益气养血、补虚止痛作用[12],现代药理学研究证实,当归、 川芎均含有的阿魏酸、挥发油等成分具有改善微循环、松弛平滑肌、抗菌消炎等作用[13-14]。白芍主要有效成分是白芍总苷,具有调节自身免疫反应等多种药理作用[15]。 处方中当归、川芎、白芍均为君药,故其有效成分可作为质量标准的主要考察指标。

由于样品来自不同厂家, 受到中药材原料产地、采收季节、加工等因素影响[16-19],造成样品被测成分含量出现大差异。川芎、当归中均含有阿魏酸,因此在本法中测定的阿魏酸含量为川芎、 当归两者的总含量。芍药苷、阿魏酸的含量结果与文献报道基本一致[3]。

《中国药典》2015 年版规定艾附暖宫丸小蜜丸中白芍苷含量不得于0.45 mg/g, 由表3 可见检测样品中芍药苷平均含量均符合规定,阿魏酸含量与文献报道一致,平均含量在0.60~0.90 mg/g,暂可定其含量为最低不得少于0.60 mg/g。

参阅文献[1-3],测试体积分数分别为25%、50%、75%、100%甲醇溶液,超声40 min,以50%甲醇提取的阿魏酸、芍药苷含量较高,因此采用50%甲醇超声30 min。 由于通过DAD 检测器扫描显示芍药苷最大吸收在230 nm、阿魏酸检测波长为321 nm,两者吸收波长存在较大差异, 因此采用了DAD 全波长扫描,将波长定位230~321 nm 区间,本实验方法简便、准确,灵敏度高,重现性好,可考虑作为艾附暖宫丸检测方法。

[1] 国家药典委员会.中国药典2010 年版[S].一部.北京:化学工业出版社,2010,625.

[2] 陈银海,HPLC 法快速测定艾附暖宫丸中芍药苷的含量[J].海峡药学,2014,26(12):55-57.

[3] 季宁平,徐晓秋,傅超美,等.HPLC 法同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸和川续断皂苷Ⅵ[J].中成药,2015,37(3):534-537.

[4] 祁秀玲,王晓琦,孙会昌,等.艾附暖宫胶囊中吴茱萸次碱含量测定的研究[J].中国现代应用药学,2012,29(7):647-649.

[5] 张雷,李琴韵,胡蓓莉,等.HPLC 测定艾附暖宫丸中吴茱萸次碱含量[J].中成药,2006,28(8):1239-1240.

[6] 丁华.中成药艾附暖宫丸质量评价性分析[J].内蒙古中医药,2014,33(2):38.

[7] 李洪亮,王珊珊,刘明,等.高效液相色谱法测定百咳静颗粒(儿童型)中黄芩苷的含量[J].广东药学院学报,2011,27(3):277-279.

[8] 詹志斌,邓可众,熊英,等.高效液相色谱法同时测定枳实中6 种成分的含量[J].中国医院药学杂志,2015,35(12):1080-1082.

[9] 汤瑶,李佐刚,王秀文,等.超高效液相色谱法同时测定丹参酮提取物中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A [J].药物分析,34(5):813-817.

[10] 张玉珍.中医妇科学[M].北京:中国中医药出版社,2009:131-134.

[11] 王秀玲.艾附暖宫丸加味治疗寒凝气滞血瘀型痛经29例疗效观察[J].甘肃中医学院学报,2015,32(3):38-39.

[12] 王霞灵.艾附暖宫汤为主治疗痛经的临床研究[J].中医药学刊,2003,21(5):668.

[13] 李曦,张丽宏,王晓晓,等.当归化学成分及药理作用研究进展[J].中药材,2013,36(6):1023-1028.

[14] 张翠英,章洪,戚琼华.川芎的有效成分及药理研究进展[J].辽宁中医杂志,2014,41(10):2264-2266.

[15] 张利.白芍的药理作用及现代研究进展[J].中医临床研究,2014,6(29):25-26.

[16] 牛晓军.浅析当前中药加工炮制中存在的问题[J].北方药学,2014,11(3):115-116.

[17] 刘金亮,范巧佳,郑顺林,等.HPLC 测定不同采收期川芎药材中5 种药效成分的含量[J].中国中药杂志,2014,39(9):1650-1655

[18] 金传山,蔡一杰,吴德玲.不同采收期亳白芍中芍药苷与白芍总苷的含量变化[J].中药材,2010,33(10):1548-1550.

[19] 钱怡云.采收加工贮藏方法对当归药材质量的影响及其定量分析模式研究[D].兰州:甘肃中医学院,2014:1-8.

猜你喜欢

川芎白芍芍药
芍药鲜切花 美景变“钱”景
陆抑非《芍药》
川芎茶调散治疗耳鼻喉科疾病举隅
白芍与不同中药配伍减毒作用浅析
川芎外治 止痛功良
美丽芍药化学成分的研究
川芎总酚酸提取工艺的优化
川芎土茯苓鱼汤缓解头痛
HPLC法同时测定白芍配方颗粒中5种成分
白芍花开