范世光，顾鹏毅，赵蔓嘉，汪佳慧，张潇木，刘国栋，梁再赋，孙晋民（中国医科大学实验技术中心一部暨国家中医药管理局中药生物工程实验室Ⅲ级，沈阳 110001）

微量法在蚯蚓粗提物蛋白质量浓度和蚓激酶活性测定中的应用

范世光，顾鹏毅，赵蔓嘉，汪佳慧，张潇木，刘国栋，梁再赋，孙晋民＊（中国医科大学实验技术中心一部暨国家中医药管理局中药生物工程实验室Ⅲ级，沈阳 110001）

目的 探讨微孔板酶联比色测定法在蚯蚓粗提物蛋白质量浓度、蚓激酶活性测定中的应用。方法 蛋白质量浓度采用改良Lowry法，蚓激酶活性采用TAME法，分别使用常量体积和微量体积，用紫外－可见分光光度计和酶标检测仪进行测量，用SPSS软件进行直线拟合，做出标准曲线，比较测量结果。结果 标准曲线截距RSD＜5%，用标准曲线检测BSA的结果显示，2种质量浓度、2种方法的回收率分别为99.6%，94.6%，101.2%和96.5%，RSD分别为3.30%，5.05%，3.36%和2.59%，经t检验3种检测结果差异无统计学意义，可以认为2种检测方法测得的数据一致。结论 可以采用微量法进行蚯蚓粗提物蛋白质量浓度、蚓激酶活性的测定。

蛋白质量浓度；蚓激酶活性；微量法；常量法

地龙又称蚯蚓，是我国传统的中药材之一。因其广泛的药理作用，可用于治疗多种疾病。目前，已从地龙体内提取了多种具有生物活性的物质，如蚓激酶、纤维蛋白溶解酶、地龙免疫活性肽、过氧化物歧化酶、金属硫蛋白及抗肿瘤成分、糖脂蛋白G－90等［14］。在对蚯蚓活性物质的提取工艺研究中，往往采用正交设计和响应面设计，样品相对较多，用常规方法操作时间较长，且试剂消耗较多，尤其在一些微量样品的操作中尤为不便，因此，我们采用微量法代替常量法，以期在较短时间内获得大量实验数据。……