马跃腾，杜双田，丁 建，纪晓朋，鲍 蕊，李 珍

(西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100)

秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究

马跃腾，杜双田，丁 建，纪晓朋，鲍 蕊，李 珍

(西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100)

【目的】 研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件，建立高效制备和再生原生质体的方法。【方法】 以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料，研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响，并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验。【结果】 (1)以0.6 mol/L NaCl为稳渗剂，用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1) ℃对菌龄6 d的菌丝酶解3 h，原生质体的产量最高。(2)以0.6 mol/L甘露醇为稳渗剂，用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1) ℃对菌龄5 d的菌丝酶解2 h，原生质体的再生率最高；验证试验结果表明，在此条件下，原生质体再生率平均为25.7%，此时原生质体平均产量为83.42×105mL-1。【结论】 对酶解温度、酶解时间、菌丝体菌龄、稳渗剂及酶系种类等条件的优化，可提高秦巴蛹虫草原生质体的产量及再生率。

秦巴蛹虫草；原生质体；原生质体制备；原生质体再生

原生质体技术是细胞生物工程育种新技术[1]，围绕原生质体技术衍生出了很多新技术，如原生质体再生无性系[2-5]、单核原生质体技术[6-7]、原生质体诱变技术、原生质体融合以及原生质体技术与分子生物学相结合的方法。目前，除驯化野生菌种外，理化诱变和原生质体技术仍是食用菌菌种选育的重要手段[8]。……