张懿 翔，丁 若垚，2，3，陈婷，郁 崇文，2，3，张兴 群*（.东华大学生态纺织教育部重点实验室，上海20620；2.东华大学纺织面料技术教育部重点实验室，上海 20620；3.东华大学纺织学院，上海 20620）

同源重组整合 vgb基因提升枯草芽孢杆菌亚麻脱胶能力

张懿 翔1，丁 若垚1，2，3，陈婷1，郁 崇文1，2，3，张兴 群1*
（1.东华大学生态纺织教育部重点实验室，上海201620；
2.东华大学纺织面料技术教育部重点实验室，上海 201620；
3.东华大学纺织学院，上海 201620）

【目的】将透明颤菌血红蛋白 （VHb）基因 （vgb）在枯草芽孢杆菌中进行整合表达，以改善枯草芽孢杆菌的呼吸强度，通过高密度培养提高果胶酶的表达量，最终明显改善脱胶效果。【方法】构建含有 vgb基因、amyE基因以及启动子 P43的 pSK－vgb（＋）质粒，通过同源重组的方法，将 vgb基因整合到枯草芽孢杆菌 A5的染色体上，得到稳定表达透明颤菌血红蛋白的枯草芽孢杆菌 A5－vgb（＋）。分别采用 PCR和 CO差光谱分析法检测 vgb基因的整合状态与血红蛋白的稳定表达，并通过发酵摇瓶试验研究 VHb对菌株果胶酶产量的影响。将构建好的 A5－vgb（＋）菌株进行脱胶试验，通过 XRD结晶度与电镜扫描分析鉴定脱胶效果。【结果】PCR与 CO差光谱检测表明，vgb基因成功整合在 A5菌株中，且正确表达的 VHb具有生物学活性，在150 rpm，37℃，pH＝8.0，16小时发酵的条件下，vgb基因的表达促使A5－vgb（＋）菌株的果胶酶产量较不含 vgb基因的菌株提升了29.5%。XRD与电镜扫描结果表明，构建的 A5－vgb（＋）菌株的脱胶效果相较于不含 vgb的菌株，在结晶度上提高了 0.55%，表面更光滑。【结论】将 vgb基因整合至枯草芽孢杆菌 A5菌株中，可提高 A5菌株的脱胶效果。

生物脱胶；……