官丽莉，陈 昱，朱 栋，韩怡来，崔 琪，李海燕，李校堃，姜 潮

(吉林农业大学 a 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，b 生命科学学院，吉林 长春 130118)

oleosin-MT融合蛋白在拟南芥中的表达及鉴定

官丽莉a,b，陈 昱a,b，朱 栋a,b，韩怡来a,b，崔 琪a,b，李海燕a,b，李校堃a，姜 潮a

(吉林农业大学 a 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，b 生命科学学院，吉林 长春 130118)

【目的】 获得转金属硫蛋白(MT)基因的拟南芥植株，为利用植物生物反应器规模化生产MT奠定基础。【方法】 利用融合PCR方法，扩增拟南芥MT基因与油体蛋白oleosin基因的融合基因，将融合基因克隆至表达载体pOP上，构建重组质粒pOP-oleosin-MT。采用冻融法将质粒pOP-oleosin-MT转入根癌农杆菌EHA105中，通过农杆菌介导法转化拟南芥，用PCR检测并筛选转基因拟南芥阳性植株，采用SDS-PAGE法检测oleosin-MT融合蛋白的表达，用邻苯三酚自氧化法和结晶紫法测定融合蛋白的体外抗氧化活性。【结果】 成功构建了植物油体特异表达载体pOP-oleosin-MT,融合蛋白oleosin-MT在拟南芥种子中成功表达，其分子质量为26 ku；总蛋白质量浓度达到50 μg/μL时，超氧阴离子的清除率最高，为58.5%；总蛋白质量浓度为10 μg/μL时，羟自由基清除率可达69.7%。【结论】 成功获得转MT基因的拟南芥株系，并证明融合蛋白oleosin-MT在拟南芥中具有良好的体外抗氧化活性。

金属硫蛋白；拟南芥；油体蛋白；基因表达

金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类低分子质量(6～7 ku)、富含半胱氨酸、可与大量金属离子(如Zn2+、Cd2+和 Cu2+)相结合的独特蛋白质或活性肽，是机体内惟一一种在金属代谢中起重要调节作用的小分子蛋白[1]。1957年，富含Cd的金属蛋白首次在马肾脏细胞中被发现[2]。……