吴新颖，桑元坤，王勇胜，张 涌，华 松

(1 西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100；2 南开大学 医学院，天津 300071；3 农业部动物生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100)

PD0325901和CHIR99021促进牛体细胞克隆胚胎体外发育的研究

吴新颖1,2，桑元坤1,3，王勇胜1,3，张 涌1,3，华 松1,3

(1 西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100；2 南开大学 医学院，天津 300071；3 农业部动物生物技术重点实验室，陕西 杨凌 712100)

【目的】 选取MAP2K和GSK3的抑制剂PD0325901、CHIR99021(简称2i)对牛体细胞核移植(SCNT)胚胎进行处理，研究这2种小分子物质对胚胎发育及其多能性基因(OCT4、SOX2、KLF4、DPPA3、CDX2、GATA4、NANOG)表达的影响。【方法】 以牛皮肤成纤维细胞为供体，牛MⅡ期卵母细胞为受体，构建牛SCNT胚胎，采用添加2i(PD0325901 0.4 μmol/L，CHIR99021 3 μmol/L)的胚胎培养液体外培养SCNT胚胎72 h，以mSOF+DMSO培养液处理的SCNT胚胎及体外受精(IVF)胚胎为对照，统计核移植胚胎体外发育率，并对胚胎多能性相关基因的表达进行实时定量PCR检测。【结果】 与对照相比，2i处理能使SCNT胚胎囊胚率和囊胚细胞总数显著增加，凋亡细胞率显著下降，多能性相关基因NANOG和SOX2表达量上调，而细胞分化相关基因GATA4的表达量下调，其他基因表达量变化不显著，从而使SCNT胚胎的发育状态更接近于IVF胚胎。【结论】 2i共处理72 h可优化SCNT胚胎发育状态。

小分子信号通路抑制剂；体细胞克隆；胚胎发育；牛

体细胞克隆(Somatic cell clone)技术，又称体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术，近年来被广泛应用于动物生产、医学研究和濒危动物保护等领域，越来越多的哺乳动物被成功克隆，如猪[1]、骡[2]、牛[3]、羊[4]、狼[5]、兔[6]、猫[7]、骆驼[8]等，这充分印证了体细胞克隆技术在理论和实践方面都具有巨大的潜力。……