涂光伟，王永康，冯骏，李晓荣，郭美锦，邹祥,4



农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化及高效筛选聚苹果酸高产菌株

涂光伟1,2，王永康1,2，冯骏1,2，李晓荣1,2，郭美锦3，邹祥1,2,4

1 西南大学药学院，重庆 400715 2 重庆药物过程与质量控制工程技术中心，重庆 400715 3 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237 4 重庆大学生物流变科学与技术教育部重点实验室，重庆 400044

涂光伟, 王永康, 冯骏, 等. 农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化及高效筛选聚苹果酸高产菌株. 生物工程学报, 2015, 31(7): 1063–1072.Tu GW, Wang YK, Feng J, et al. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Aureobasidium pullulans and high-efficient screening for polymalic acid producing strain. Chin J Biotech, 2015, 31(7): 1063–1072.

建立根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法及T-DNA突变库，高效筛选聚苹果酸高产菌株及功能基因。通过含潮霉素和草铵磷抗性基因的农杆菌转化出芽短梗霉，抗性压力筛选及PCR验证建立根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法，结合发酵液pH与聚苹果酸含量响应变化，微孔板高效筛选高产聚苹果酸的T-DNA插入突变株，基因组步移确定T-DNA插入位点及功能基因。结果获得遗传稳定的抗性基因菌株，每107个细胞可获得80−120个转化子，出芽短梗霉H27 号T-DNA突变株聚苹果酸摇瓶发酵产量提高24.5%，基因组步移证实糖酵解途径磷酸甘油酸变位酶基因被破坏。成功建立了根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法和T-DNA插入突变库，结合高效筛选方法为聚苹果酸合成功能基因挖掘及高产机制解析奠定基础。

农杆菌，出芽短梗霉，遗传转化，高效筛选，聚苹果酸

出芽短梗霉是一种具有工业应用价值的真菌，能发酵产生聚苹果酸、葡萄糖酸、普鲁兰多糖、酶制剂等多种代谢产物，其中聚苹果酸是一种新型聚酯型聚合物，具有良好的水溶性、生物安全性和易降解性，可用于新型药物载体、组织工程、食品包装材料等领域。……