李敬涛 吴 超 王 雅 黄开松 金梅林

农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院，武汉 430070

湖北部分地区红斑丹毒丝菌分离株耐药性分析

李敬涛 吴 超 王 雅 黄开松 金梅林*

农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院，武汉 430070

采用药敏纸片扩散法对31株湖北部分地区分离株进行19种临床常用抗生素耐药性试验分析，结果表明：临床分离株对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B、万古霉素和磺胺异恶唑的耐药率为100%，庆大霉素、复方新诺明、氧氟沙星、壮观霉素、林可霉素和四环素的耐药率分别为96.8%、83.9%、32.3%，25.8%，22.6%和9.67%，对头孢拉定、阿莫西林和阿奇霉素高度敏感。

红斑丹毒丝菌；耐药性；药敏试验

红斑丹毒丝菌是一种革兰氏阳性小杆菌，是猪丹毒的主要病原菌[1]。近些年来，中国南方部分地区暴发大规模的猪红斑丹毒丝菌感染疫情，主要表现为急性败血症和疹块型，以3～6月龄架子猪发病率最高，可引起母猪的急性死亡，给养猪业带来了巨大的经济损失，同时给人类健康造成了潜在威胁。本实验室对湖北省8个不同地区猪场临床分离株进行了药物敏感性测定，为临床用药提供理论依据，避免滥用抗生素，减缓红斑丹毒丝菌产生耐药性的速度。

1 材料与方法

1.1 试验菌株

红斑丹毒丝菌（31株）。本实验室于2012-2013 年10月从湖北省8个不同地区（武汉市15株、荆州市7株、沙洋3株，松滋、钟祥、随州各2株）的猪场发生猪丹毒的病死猪中分离、纯化和鉴定。

1.2 培养基和药敏纸片

TSA（胰蛋白胨大豆琼脂）和TSB（胰蛋白胨大豆肉汤培养基）购自美国BD公司；新生牛血清购自杭州四季青生物公司；强力霉素、卡那霉素、氧氟沙星、链霉素、阿莫西林、庆大霉素、阿米卡星、多粘菌素B、万古霉素、复方新诺明、壮观霉素、环丙沙星、恩诺沙星、林可霉素、四环素、青霉素、磺胺异恶唑、头孢拉定、阿其霉素、克林霉素，购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 药敏试验

取冻干保存的待测菌株，于TSA平板划线，37℃复苏。挑取培养的红斑丹毒丝菌单菌落于添加10%血清的TSB培养基中培养24 h。按1∶500转接添加10%血清的TSB培养基中培养至对数中期。用无菌棉拭子蘸取菌液均匀涂于TSA培养基表面。平板于室温下干燥后将抗生素纸片紧贴于琼脂表面。37℃恒温培养18 h，观察结果。参考美国临床实验室标准委员会（NCCLS）药敏纸片扩散法，以抗生素的抑菌环和敏感标准作为判定依据。

1.4 耐药率和耐药谱的分析

耐药率的测定。对某种抗生素的耐药菌株数占分离株的猪链球菌总数的百分比。

耐药谱的测定。统计同一菌株对不同抗生素的耐药率。

2 结 果

2.1 药敏试验结果

选择19种较常见的抗生素药敏纸片对31株分离株进行药敏试验。结果显示，这3株猪红斑丹毒丝菌均对氨苄青霉素、青霉素、阿莫西林、复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松耐药；对氟哌酸、替考拉宁、恩诺沙星敏感，其中对恩诺沙星的抑菌圈最大，最为敏感，对其他5种抗生素敏感性不一。见表1、表2。

表1 31株红斑丹毒丝菌的药敏试验结果

2.2 红斑丹毒丝菌的耐药性

31株红斑丹毒丝菌分离株对19种抗生素有不同的耐药性，所有菌株均对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B、万古霉素和磺胺异恶唑耐药，庆大霉素和复方新诺明的耐药率分别为96.8%和83.9%，氧氟沙星、壮观霉素、林可霉素和四环素的耐药率分别为32.3%、25.8%、22.6%和9.67%。其他药物未发现耐药性。见图1。

2.3 红斑丹毒丝菌分离株耐药谱分析

31株红斑丹毒丝菌对19种抗生素耐药谱分析结果见表3，所有分离株均对多种抗生素有不同程度的耐药性，有30株对8种及以上的抗生素耐药，占分离株的96.8%，只有一株菌耐7种抗生素，可见临床分离株的多重耐药比较严重。

3 讨 论

从31株红斑丹毒丝菌对19种抗生素耐药性分析结果显示，所有菌株对不同抗生素具有多重耐药性，可见湖北省的一些猪场耐药性很普遍，而且耐药谱广，究其原因可能是：红斑丹毒丝菌在健康猪的扁桃体和淋巴组织中的分离率高达30%～50%[2]，养殖户在养殖和疾病防控时大量使用抗生素加速了多重耐药的产生；红斑丹毒丝菌可能和其他种类的细菌发生基因组交流。因此，在临床选择治疗猪丹毒时应高度重视，合理用药。

图1 红斑丹毒丝菌对20种抗生素的耐药率

表2 31株红斑丹毒丝菌的药敏试验结果

表3 不同红斑丹毒丝菌分离株对20种抗生素耐药谱测定结果

本研究选取常见的19种抗生素对临床分离株进行药敏试验，结果表明31株分离菌对青霉素、头孢他啶、阿奇霉素敏感性最强，对喹诺酮类药物如恩诺沙星和环丙沙星的敏感性降低，对卡那霉素、链霉素、磺胺异恶唑、阿莫西林、万古霉素完全耐药，未发现耐青霉素菌株。在这次中国猪丹毒疫情暴发之前，红斑丹毒丝菌对青霉素高度敏感，一直是发生猪丹毒疫情的首选药[3-6]，何世成等报道湖南红斑丹毒丝菌临床分离株HR-6、ZY-8、XY-9对氨苄青霉素、青霉素、阿莫西林、头孢噻肟和头孢曲松均产生耐药性[7]，但是这次安徽和广州的分离株还是对青霉素高度敏感[8-9]。中国的这次猪丹毒疫情暴发，湖南省产生了耐青霉素菌株，因此其他省份在治疗猪丹毒时，选择青霉素时应谨慎。此外，这次猪丹毒疫情暴发的临床分离株对磺胺类药物产生了耐药性，对喹诺酮类药物的敏感性在降低，红斑丹毒丝菌的耐药性越趋严重。

张乐宜等[8]报道，此次广州猪丹毒疫情，在临床治疗过程中采用饲料添加阿莫西林、头孢类药物同时肌注两类药物的方法，短期内不能控制疫情的持续发生，须持续用药10～14 d。在临床使用头孢类和青霉素类药物，应注意使用的剂量、次数、时间和反复用药，否则会导致部分红斑丹毒丝菌不被抑杀，从而产生耐药性。

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2015-01-04

李敬涛，男，1988年生，在读硕士生，研究方向：动物传染病学。