陈以军，任亚硕，吴德玲，张 伟，汪天明

（1．六安市立医院，安徽 六安 237001；2．现代中药安徽省重点实验室，安徽 合肥 230038；3．安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230038；安徽中医药大学科技处，安徽 合肥 230038）

醉鱼草果实药材是马钱科植物醉鱼草（BuddlejalindleyanaFort．）的果实，具有祛风除湿、止咳化痰、散瘀之功效［1］。本课题组已从中发现并报道了多种成分及其生物活性［2－5］，包括多种黄酮类成分，其中木犀草素作为一种常见黄酮，是其抗菌消炎作用的主要活性成分［6－7］，具有较强的抗炎抗氧化活性［8］。另外它还具有抗肿瘤、防治心血管疾病以及保护心肌细胞等多种药理活性［9－11］。经查阅相关文献，木犀草素广泛存在于醉鱼草属植物中，前期系统分离实验也从醉鱼草果实中分离得到木犀草素等多种黄酮类成分［4］，但醉鱼草果实中木犀草素含量测定的方法尚未见报道。故笔者参考相关文献［12－13］，采用反相高效液相色谱法建立了醉鱼草果实中木犀草素含量的测定方法，以期为醉鱼草这一传统药用资源的系统开发提供参考。

1 仪器与试药

1．1 仪器 高效液相色谱仪：美国 Agilent 1260（二元泵：G1312C，柱温箱：G1316A，DAD检测器：G4212B，自动进样器：G1329B）；AB135－S十万分之一分析天平：瑞士 METTLER TOLEDO；HH－S恒温水浴锅：江苏金坛市国胜实验仪器厂；FZ－02型高速中药粉碎机：浙江省温岭市百乐粉碎设备厂；AS3120超声清洗仪：天津奥特塞恩斯；Milli－Q一体式超纯水系统：德国默克密理博。

1．2 试药 木犀草素：中国药品生物制品检定所，批号111520－200504；醉鱼草果实：2008年12月采自安徽舒城万佛山，经安徽中医药大学药学院刘守金教授鉴定为马钱科植物醉鱼草（BuddlejalindleyanaFort．）的果实；甲醇：色谱纯；水：实验室自制超纯水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Welch Ultimate AQ－C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：甲醇－水－乙酸（60∶40∶2），流速：1ml／min；检测波长：350nm；柱温：25℃；进样量：20μl。在本色谱条件下，木犀草素的理论塔板数大于3 000，其色谱峰与共存物质色谱分离度大于1．5。木犀草素（对照品）及醉鱼草果实（供试品）的高效液相色谱图见图1。

图1 对照品（A）与供试品（B）溶液的反相高效液相色谱图

2．2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h以后的木犀草素对照品2．16mg，加适量甲醇溶解，定容至100ml，即得浓度为21．6μg／ml的木犀草素对照品溶液。

2．3 供试品溶液的制备 精密称取醉鱼草果实粗粉1g，加甲醇20ml回流提取1h，提取3次，合并滤液，定容至100ml，用微孔滤膜（0．45μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2．4 方法学考察

2．4．1 线性关系考察：精密吸取“2．2”项下木犀草素对照品溶液，分别进样2、5、8、10、15、20μl，测定峰面积，以峰面积积分值（y）为纵坐标，木犀草素的进样量（x）为横坐标，绘制标准曲线。得木犀草素线性回归方程为：y＝3 610．4x－5．22，r＝0．999 9。结果表明，木犀草素进样量在0．043 2～0．432 0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2．4．2 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，记录各次木犀草素的峰面积值，RSD＝0．33%。表明仪器精密度良好。

2．4．3 重复性试验：精密称取醉鱼草粗粉1g，同“2．3”项下方法制备供试品溶液6份，在拟定的色谱条件下，进样分析，测定峰面积，计算木犀草素的平均含量为0．096%，RSD＝1．28%。表明重复性良好。

2．4．4 稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h测定，记录木犀草素峰面积值，其RSD＝1．17%。表明样品溶液在12h内稳定。

2．4．5 加样回收率试验：精密称取已知含量的醉鱼草果实粗粉1g，共6份，置50ml圆底烧瓶中，分别精密加入与药材含量相当的木犀草素对照品，然后按“2．3”项步骤的供试品溶液制备方法制备，测定。结果表明，所建立的分析方法准确度良好。见表1。

表1 加样回收率试验

2．5 样品含量测定 按“2．3”项下步骤操作，制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件，测得供试品中木犀草素含量为0．093%、0．095%、0．096%，平均含量为0．095%。

3 讨论

本实验中采用二极管阵列检测器，在190～400 nm波长范围内对供试品及对照品溶液进行光谱扫描，结果供试品溶液与对照品溶液木犀草素对应峰的最大吸收波长均为350nm，且基本无干扰，因此选择350nm作为检测波长。流动相采用甲醇－水系统，并加入一定比例的乙酸，抑制其拖尾现象，最终选定流动相为甲醇－水－乙酸（60∶40∶2）。此时有良好的分离度，峰形尖锐，分析时间在25min以内。确定测定条件之后，又对醉鱼草果实样品的提取溶剂进行考察，分别选取水，不同浓度的乙醇、甲醇、乙酸乙酯等多种溶剂进行提取，结果发现甲醇回流提取时，测得木犀草素含量最高。

醉鱼草为民间常用中草药，但其果实研究属于空白，不利于醉鱼草资源的综合开发。本研究通过高效液相色谱法建立了醉鱼草果实中木犀草素的含量测定方法，结果显示该方法简便、快速、结果可靠、稳定、重现性好，为醉鱼草果实中黄酮类成分的研究提供了参考依据。由醉鱼草果实的高效液相色谱图可知，木犀草素之前的色谱峰对应成分含量较高，且极性比木犀草素大。由于本实验所选波长主要是为了检测黄酮类成分，故推测其对应成分可能为黄酮苷类化合物。故本实验对醉鱼草果实的系统分离工作也具有一定的指导意义。

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