周 颖，张 辉，谢永红，赵 敏，沈 彦，尹端端

0 引 言

缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)是近年发现的一种转录因子，已有研究发现HIF-1α在肺癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中过度表达。p-糖蛋白(p-glycoprotein，p-gp)介导的多药耐药(multidrug resistance，MDR)在人类肿瘤中具有普遍性，由MDR/p-gp介导的耐药机制在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中亦占有重要地位。人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种DNA病毒，感染人和动物的皮肤或黏膜可引起增殖性损伤。近年来，越来越多的国内外临床和实验室研究检测出肺癌患者携带HPV［1-2］，尤其是HPV 16、18型。HPV感染与肺癌的关系，目前说法不一，肺癌中HIF-1α、p-gp与HPV感染的关系亦报道较少。本研究通过研究NSCLC中HIF-1α和p-gp的相关性，探讨HIF-1α和p-gp在NSCLC发生发展及MDR中的作用，并初步分析其与HPV感染的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集我院2012年1-5月NSCLC患者的手术标本60份作为NSCLC组，患者中男46例，女14例;鳞癌42例，腺癌18例;高分化12例，中分化29例，低分化19例;淋巴结转移30例，无淋巴结转移30例;有吸烟史43例，无吸烟史17例。另以20份肺良性病变组织作为对照，其中包括肺结核6份，炎性假瘤5份，硬化性血管瘤4份，肺大疱4份，支气管扩张1份。标本取材后，部分置-20℃保存，部分中性甲醛固定，石蜡包埋。

1.2 HPV PCR 检测

1.2.1 引物 选用分别用来扩增HPV16、18型的特异性引物2对。HPV16E6正义链:5'-CTGCAAGCAACAGTTACTGCGACG-3'，反义链:5'-CATACATCGACCGGTCCACC-3'，长度 315 bp;HPV18E7 正义链:5'-GAGCCGAACCACAACGTCAC-3'，反义链:5'-GGATGCACACCACGGACACA-3'，长度152bp。引物均由北京奥科生物公司合成。

1.2.2 组织DNA的提取 取适量冻存组织，加提取缓冲液制成单细胞悬液后，沸水浴10 min，冷却至室温加蛋白酶K消化，酚-氯仿-异戊醇反复抽提3次，再经100%冰冷无水乙醇沉淀、70%冰冷无水乙醇洗涤后，加 TE(10 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，PH 8.0)缓冲液溶解所得DNA并4℃保存。……