齐 庆，李永贤，陈英杰，李东海，朱 珂，查旭山

（1.广州中医药大学第一临床医学院、第一附属医院皮肤科，广东 广州510405；2.广州中医药大学第一临床医学院2009 级本科班，广东 广州510405）

软皮汤来源于邓铁涛教授治疗硬皮病的理论——硬皮病治疗时应以补肾益精为主，健脾养肺为辅。 软皮汤能减轻患者皮肤硬化症状，其具体机制仍不明确[1-2]。 前期研究提示，在体外其作用靶向于TGF-β 通路[3-4]，可能与活化因子SMAD3、抑制因子FLI1 之间的平衡变化有关[5]。 然而，机体复杂的微环境有别于体外细胞模型，诸多因素影响细胞因子作用；因此，有必要深入开展相关体内研究。 本研究将基于小鼠硬皮病模型，继续探讨软皮汤在体内对TGF-β 通路中SMAD3、FLI1 等因子“平衡”的影响，现将方法与结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雌性C57BL/6J 小鼠30 只，6～8 周龄， 体质量（20.0±1.4）g，购于中山大学实验动物中心，合格证NO.44008500000277。

1.2 主要试药与试剂

中药：补肾益精复方软皮汤处方来源于广州中医药大学第一附属医院皮肤科， 药物组成： 阿胶10 g，山茱萸10 g，熟地黄20 g，黄芪30 g，山药30 g，茯苓15 g，川红花5 g。 加蒸馏水1 200 mL，浸泡20 min 后， 沸煮45 min， 过滤收集药液。100 ℃水浴蒸发， 使药液浓缩至134 mL （生药量0.9 g/mL）。 博来霉素bleomycin（#9041-93-4）购于Aladin 公司。 Masson 染色试剂盒购于南京建成生物工程研究所 （#D026）。 抗体：CollagenⅠ(#sc8788)、FLI1 (#sc356) 购 于Santa cruz 公 司；Fibronectin(#ab2413) 购 于Abcam 公 司；SAMD3 （#9532），p-SMAD3（#8828），β-Actin（#3700）购于Cell signaling technology 公司。 ECL 发光试剂盒购于广州永诺生物科技有限公司（#F0010）。

1.3 主要仪器

AB-160 型电子分析天平 （美国Denver 公司）；Power Tone XL 超薄切片机 （美国Boeckeler RMC 公司）；Olympus BXDX 光学显微镜 （日本Olympus 公司）；微型电泳电转移系统（美国Bio-Rad 公司）；BX 51 光学显微镜照相系统 （日本Olympus 公司）；CR 21G 高速冷冻离心机 （日本Hitachi 公司）。……