孙吉东

目前刺参育苗与养殖生产面临着诸多问题[1-2]，为了刺参增养殖业的健康发展[3]，一定要深刻认识刺参的生物学特性，特别是对温度、盐度[4]等水质条件的要求，掌握温度和盐度对刺参在胚胎发育、人工育苗及增养殖的影响至关重要[5]。通过计算孵化率而掌握刺参胚胎发育所需最适温度和盐度，最大限度地提高刺参的育苗产量，为此我们进行实验研究。

1材料与方法

1.1实验器材与相关材料的准备

1.1.1玻璃器材250 mL烧杯35个，500 mL烧杯2个；1 000 mL烧杯2个；500 mL量筒2个、100 mL量筒1个；1 mL、 5 mL、10 mL胶头吸管各2个、3 mL吸管若干；玻璃棒2个；玻璃棒温度计6个；漏斗3个；5 000 mL三角烧瓶8个；载玻片、盖玻片各1盒。

1.1.2塑料器材塑料器材：50 L塑料孵化箱8个； 20 L水桶16个；水舀2个。

1.1.3其他器材其他器材：显微镜；2 000 W加热棒6个；可调自动控温仪8个；数码照相机1个；海水密度计1个；0～100‰盐度计1个。

3结果与讨论

从表1和表3得出：温度在20～21 ℃时，盐度10‰和50‰的情况下，胚胎完全不能正常发育，盐度20‰和40‰时胚胎除了出现极体外，其它过程都不能正常进行，而盐度在29‰时胚胎发育能正常进行。而且变态形成小耳状幼体的时间是25 h 20 min～31 h 30 min。

从表2和表3得出：盐度在29‰的情况下，温度在12 ℃和35 ℃及40 ℃的情况下，胚胎都不能正常发育，温度在28 ℃的情况下，除了可见胚胎极体出现和分裂成2个细胞，其它都不能正常进行。温度在20 ℃的情况下，形成小耳状幼体的时间是25 h 20 min～31 h 30 min。

从表3可以看出：在温度20～21 ℃时，盐度29‰的情况下，刺参胚胎发育能正常进行，发育过程经过了卵裂、囊胚、原肠胚、形成耳状幼虫[10]。

从表4可以看出：温度在20～21 ℃的情况下，盐度在22‰、27‰、32‰时孵化率分别为55%、75%、50%。

从表5可以得出：盐度在27‰的情况下，温度15 ℃、20 ℃、28 ℃、30 ℃时，孵化率分别为35%、75%、60%、55%。

当水温在20～21 ℃时，盐度的变化使孵化率由大变小的顺序为：27‰>22‰>32‰>20‰=36‰ ；

当盐度在27‰时，温度的变化对孵化率由大到小的影响：20 ℃>28 ℃>30 ℃>15 ℃。

4结论

温度在20～21 ℃的情况下，而盐度在22‰～29‰时刺参胚胎发育能正常进行，而且孵化率在50%以上。

盐度在27‰的情况下，而温度在20～30 ℃时刺参胚胎发育都能正常进行，孵化率在55%以上。

刺参胚胎正常发育的条件是温度20～30 ℃，盐度22‰～29‰，而且孵化率最高的条件为20 ℃，盐度27‰，孵化率为75%。

参考文献：

[1]

王立超，孙德华.刺参的病害与防治[J].齐鲁渔业，2004，21（09）：25

[2] 隋锡林，邓欢.刺参池塘养殖的病害及防治对策[J].水产科学，2004，23（6）：22-23

[3] 王连华.无公害刺参养殖技术[J].齐鲁渔业，2004，22（12）：22-24

[4] 陈勇，高峰，刘国山，等.温度、盐度和光照周期对刺参生长及行为的影响[J].水产学报，2007，31（5），687-691

[5] 陈爱华.刺参养殖水环境调控技术[J].中国水产，2008（11）：57-58

[6] 隋锡林.刺参人工育苗及增养殖技术[J].水产科学，2003，22（06）：52-53

[7] 王印庚，荣小军，张春云，等.养殖海参主要疾病及防治技术[J].海洋科学，2005（03）：1-7

[8] 张群乐，刘永宏.海参海胆增养殖技术[M].青岛：青岛海洋大学出版社，1998：28-29

[9] 谭杰，孙慧玲，高菲，等.刺参受精及早期胚胎发育过程的细胞学观察[J].水产学报，2012，36（2）：272-275

[10] 山东海洋学院海洋生物系.刺参的生殖和发育[J].水产科技情报，1977（Z4）：10-16

（收稿日期：2014-08-02；修回日期：2014-08-18）

1.1.4相关材料相关材料：脱脂棉2卷；10 mm2铜电线50 m；多孔插排2个；甲醛1瓶；冷冻矿泉水1箱；卤水10 L。

1.2实验前亲参的准备

1.2.1采捕时间采捕时间：在2013年10月底、11月初采捕一批亲参。

1.2.2采捕地点采捕地点：金州玉兔岛自然海区。

1.2.3采捕数量采捕数量：共采捕360头亲参，每个平均250 g以上[6]。

1.2.4工具消毒工具消毒：采捕工具使用前浸泡消毒处理，用清水清洗干净后使用。

1.3实验方法

1.3.1刺参的培育管理

水温：亲参入池水温为10 ℃，适应3 d后开始升温，每3 d升0.5 ℃，升到14 ℃后开始恒温培养，升至16 ℃恒温培养，直到自然排卵。

饵料：采用干海泥和配合饲料混合投喂，二者混合后用水搅拌，做成条形或块状晒干后投喂。

换水与倒池：3 d换水清底一次，15 d倒池一次。

充气：采取间歇式[7]，充1 h停0.5 h，暗光培育。

盐度：29‰

1.3.2实验用水调配淡水盐度为0‰，卤水的盐度为290‰。自然海水的盐度是29‰；实验的盐度设有10‰、20‰、30‰、40‰、50‰以及22‰、27‰、32‰、36‰；低盐度的海水用自然水（29‰）加淡水调配，高盐度的用自然水（29‰）加卤水调配。

1.3.3计算公式

当降低盐度时：（L-L1）×（S-S1）=（S1-S2）L1

当升高盐度时：（L-L1）×（S1-S）=（S2-S1）L1

L2=L-L1

公式中，L为所需配水的数量（mL）；L1为所需淡水或卤水的数量（mL）；L2为所需自然海水的数量（ mL）；S为自然海水的盐度（‰）；S1为配水所需达到的盐度（‰）；S2为淡水或卤水的盐度（‰）。

1.3.4实验用水温度的控制将装有调配水的烧杯或水桶放入孵化箱或水桶内，在孵化箱或水桶内放入瓶装冰降温或可调温控仪的加热棒调整所需的温度。

1.4实验过程

通过阴干、流水、升温诱导刺激的方式来采卵[8]。先将蓄养池内海水放干，在池底摆好刺参阴干1 h，再用大水流流水刺激0.5 h，然后加高温水（比蓄养水温高2～3 ℃），2 h后雄参开始排呈一缕乳白色烟雾状的精液，徐徐散开，再过0.5 h雌参开始排出一条桔红色绒线状波浪式的卵子，然后慢慢散开沉于盆底。

分别取3头排放量较大的雌参和雄参，分别放入两个盛有相同温度海水的大盆中，让其分别产卵与排精，不到15 min大盆内卵的密度就达到200粒/mL以上，雄参的盆内已经看不到底了，分别将亲参取出放入产卵池内，同时不断搅动盆内的水体，使卵和精液分布均匀，取一定量的精液加入卵的盆内并不断搅水，镜检观察视野内一个卵周围可见3～5个精子[9]即可，然后取样计数并观察卵子受精情况，每个烧杯内受精卵的密度是10粒/mL。

实验种参产卵时水温20～21 ℃、盐度29‰，实验分四组：

一组：实验是在水温20～21 ℃，盐度分别控制在10‰、20‰、29‰、40‰、50‰五种条件，每种盐度下设三个烧杯重复实验；胚胎发育结果见表1、表3。

二组：在盐度为29‰不变时，水温分别控制在12 ℃、20 ℃、28 ℃、35 ℃、40 ℃五种条件，每种温度下设三个烧杯进行重复实验。胚胎发育结果见表2，表3。

三组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入水温为20～21 ℃，盐度分别是22‰、27‰、32‰、36‰的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表4。

四组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入盐度为27‰，水温分别是15 ℃、20 ℃、28 ℃、30 ℃的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表5。

日常管理：首先每1 h用玻璃棒搅动烧杯内水体一次，防止受精卵长时间沉入杯底，影响孵化率；其次要随时观察各孵化箱内的水温，防止温差过大，影响孵化率。

随时镜检观察，待胚胎发育至初耳状幼体时期镜检定量，具体方法是用量筒将桶水搅匀再用5 mL吸管上、中、下层不同位置吸4个5 mL，共计20 mL，用甲醛杀死后将幼体全部吸出，用显微镜计数定量，结果见表4和表5。

2实验结果

刺参胚胎发育情况见表1-表5。

表1水温20～21 ℃，不同盐度下刺参胚胎发育状况

1.3.2实验用水调配淡水盐度为0‰，卤水的盐度为290‰。自然海水的盐度是29‰；实验的盐度设有10‰、20‰、30‰、40‰、50‰以及22‰、27‰、32‰、36‰；低盐度的海水用自然水（29‰）加淡水调配，高盐度的用自然水（29‰）加卤水调配。

1.3.3计算公式

当降低盐度时：（L-L1）×（S-S1）=（S1-S2）L1

当升高盐度时：（L-L1）×（S1-S）=（S2-S1）L1

L2=L-L1

公式中，L为所需配水的数量（mL）；L1为所需淡水或卤水的数量（mL）；L2为所需自然海水的数量（ mL）；S为自然海水的盐度（‰）；S1为配水所需达到的盐度（‰）；S2为淡水或卤水的盐度（‰）。

1.3.4实验用水温度的控制将装有调配水的烧杯或水桶放入孵化箱或水桶内，在孵化箱或水桶内放入瓶装冰降温或可调温控仪的加热棒调整所需的温度。

1.4实验过程

通过阴干、流水、升温诱导刺激的方式来采卵[8]。先将蓄养池内海水放干，在池底摆好刺参阴干1 h，再用大水流流水刺激0.5 h，然后加高温水（比蓄养水温高2～3 ℃），2 h后雄参开始排呈一缕乳白色烟雾状的精液，徐徐散开，再过0.5 h雌参开始排出一条桔红色绒线状波浪式的卵子，然后慢慢散开沉于盆底。

分别取3头排放量较大的雌参和雄参，分别放入两个盛有相同温度海水的大盆中，让其分别产卵与排精，不到15 min大盆内卵的密度就达到200粒/mL以上，雄参的盆内已经看不到底了，分别将亲参取出放入产卵池内，同时不断搅动盆内的水体，使卵和精液分布均匀，取一定量的精液加入卵的盆内并不断搅水，镜检观察视野内一个卵周围可见3～5个精子[9]即可，然后取样计数并观察卵子受精情况，每个烧杯内受精卵的密度是10粒/mL。

实验种参产卵时水温20～21 ℃、盐度29‰，实验分四组：

一组：实验是在水温20～21 ℃，盐度分别控制在10‰、20‰、29‰、40‰、50‰五种条件，每种盐度下设三个烧杯重复实验；胚胎发育结果见表1、表3。

二组：在盐度为29‰不变时，水温分别控制在12 ℃、20 ℃、28 ℃、35 ℃、40 ℃五种条件，每种温度下设三个烧杯进行重复实验。胚胎发育结果见表2，表3。

三组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入水温为20～21 ℃，盐度分别是22‰、27‰、32‰、36‰的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表4。

四组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入盐度为27‰，水温分别是15 ℃、20 ℃、28 ℃、30 ℃的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表5。

日常管理：首先每1 h用玻璃棒搅动烧杯内水体一次，防止受精卵长时间沉入杯底，影响孵化率；其次要随时观察各孵化箱内的水温，防止温差过大，影响孵化率。

随时镜检观察，待胚胎发育至初耳状幼体时期镜检定量，具体方法是用量筒将桶水搅匀再用5 mL吸管上、中、下层不同位置吸4个5 mL，共计20 mL，用甲醛杀死后将幼体全部吸出，用显微镜计数定量，结果见表4和表5。

2实验结果

刺参胚胎发育情况见表1-表5。

表1水温20～21 ℃，不同盐度下刺参胚胎发育状况

1.3.2实验用水调配淡水盐度为0‰，卤水的盐度为290‰。自然海水的盐度是29‰；实验的盐度设有10‰、20‰、30‰、40‰、50‰以及22‰、27‰、32‰、36‰；低盐度的海水用自然水（29‰）加淡水调配，高盐度的用自然水（29‰）加卤水调配。

1.3.3计算公式

当降低盐度时：（L-L1）×（S-S1）=（S1-S2）L1

当升高盐度时：（L-L1）×（S1-S）=（S2-S1）L1

L2=L-L1

公式中，L为所需配水的数量（mL）；L1为所需淡水或卤水的数量（mL）；L2为所需自然海水的数量（ mL）；S为自然海水的盐度（‰）；S1为配水所需达到的盐度（‰）；S2为淡水或卤水的盐度（‰）。

1.3.4实验用水温度的控制将装有调配水的烧杯或水桶放入孵化箱或水桶内，在孵化箱或水桶内放入瓶装冰降温或可调温控仪的加热棒调整所需的温度。

1.4实验过程

通过阴干、流水、升温诱导刺激的方式来采卵[8]。先将蓄养池内海水放干，在池底摆好刺参阴干1 h，再用大水流流水刺激0.5 h，然后加高温水（比蓄养水温高2～3 ℃），2 h后雄参开始排呈一缕乳白色烟雾状的精液，徐徐散开，再过0.5 h雌参开始排出一条桔红色绒线状波浪式的卵子，然后慢慢散开沉于盆底。

分别取3头排放量较大的雌参和雄参，分别放入两个盛有相同温度海水的大盆中，让其分别产卵与排精，不到15 min大盆内卵的密度就达到200粒/mL以上，雄参的盆内已经看不到底了，分别将亲参取出放入产卵池内，同时不断搅动盆内的水体，使卵和精液分布均匀，取一定量的精液加入卵的盆内并不断搅水，镜检观察视野内一个卵周围可见3～5个精子[9]即可，然后取样计数并观察卵子受精情况，每个烧杯内受精卵的密度是10粒/mL。

实验种参产卵时水温20～21 ℃、盐度29‰，实验分四组：

一组：实验是在水温20～21 ℃，盐度分别控制在10‰、20‰、29‰、40‰、50‰五种条件，每种盐度下设三个烧杯重复实验；胚胎发育结果见表1、表3。

二组：在盐度为29‰不变时，水温分别控制在12 ℃、20 ℃、28 ℃、35 ℃、40 ℃五种条件，每种温度下设三个烧杯进行重复实验。胚胎发育结果见表2，表3。

三组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入水温为20～21 ℃，盐度分别是22‰、27‰、32‰、36‰的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表4。

四组：取一些囊胚期的胚胎定量后分别放入盐度为27‰，水温分别是15 ℃、20 ℃、28 ℃、30 ℃的各个水桶里，每桶装水14 000 mL水，密度为1粒/mL，见表5。

日常管理：首先每1 h用玻璃棒搅动烧杯内水体一次，防止受精卵长时间沉入杯底，影响孵化率；其次要随时观察各孵化箱内的水温，防止温差过大，影响孵化率。

随时镜检观察，待胚胎发育至初耳状幼体时期镜检定量，具体方法是用量筒将桶水搅匀再用5 mL吸管上、中、下层不同位置吸4个5 mL，共计20 mL，用甲醛杀死后将幼体全部吸出，用显微镜计数定量，结果见表4和表5。

2实验结果

刺参胚胎发育情况见表1-表5。

表1水温20～21 ℃，不同盐度下刺参胚胎发育状况