李建军 马清峰 张 静 熊 亮，＃

高血压是诱发心脑血管性疾病的主要危险因素之一，高血压时湍流和剪切应力的增加可导致动脉内膜损伤，损伤部位易发生脂质沉积和血小板聚集，从而发生粥样硬化。颈动脉粥样硬化（CAS）最初被认为是一种大中动脉退行性、增生性、全身性疾病。之后研究发现，CAS是一种与免疫和炎症反应密切相关的慢性疾病。作为重要炎症信号通路的白细胞分化抗原40（CD40）和154（CD154，又称CD40L）这一对受体-配体的相互作用参与了CAS的发生和发展［1］；基质金属蛋白酶（MMPs）是CAS斑块中炎症细胞的产物，亦与CAS的发生、发展密切相关［2］。本文通过对150例高血压患者颈动脉内膜中层厚度（CIMT）、硬化斑块指数（Plaque Index，PI）和 血 清 CD40、CD40L 和MMP-9水平的测定，分析高血压患者CAS与CD40、CD40L及MMP-9水平变化的关系，为防治、延缓CAS提供新的治疗靶点。

1 资料与方法

1.1 对象及分组

2012-01至2012-12本院门诊和住院的150例原发性高血压患者，其中男87例，女63例，平均年龄（63.40±5.70）岁，平均收缩压（20.60±1.40）KPa，平均舒张压（15.96±1.70）KPa。原发性高血压诊断符合1999年WHO／ISH关于高血压的诊断标准［3］，并且排除继发性高血压、合并感染、血糖血脂异常及其它严重慢性病患者。CAS以2003年欧洲高血压治疗指南［4］中CIMT＞0.90mm为诊断标准，1.20mm＞CIMT≥0.90mm 为颈动脉粥样增厚，CIMT≥1.20mm为颈动脉粥样斑块形成。150例高血压患者分为CIMT正常组（n＝11）、CIMT增厚组（n＝30）和CIMT斑块组（n＝109）。同时采用PI分级法［5］将150例高血压患者分为PI 0级（CIMT＜1.2mm且无斑块，n＝41）、PI 1级（CIMT介于1.2-2.0mm之间或仅有1个斑块，n＝34）、PI 2级（CIMT介于2.1-4.0mm之间，有1个或数个斑块，n＝62）和PI 3级（CIMT＞4.0mm，且有多个斑块，n＝13）。50例健康体检者为对照组，其中男34例、女16例，平均年龄（61.70±4.90）岁，血压均在正常范围内（即收缩压＜15.96KPa，舒张压＜10.64KPa），未发现心脑血管疾病，血糖、血脂未见异常。各组患者与对照组性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检查方法

1.2.1 彩色多普勒超声检测CIMT和PI：采用日本东芝Aplio XG（SSA-790A）全数字化彩色多普勒超声诊断仪，于初次就诊时测量。患者取低枕仰卧位，充分暴露颈部，探头频率7.5MHz，取长轴切面，分别测量双侧颈总动脉远端1.0cm处CIMT最大数值，取双侧平均值为CIMT的平均值。同时于彩色多普勒超声下观察斑块数量，结合CIMT来进行PI分级。

1.2.2 ELISA 测定血清 CD40、CD40L及 MMP-9水平：所有患者均在初次就诊时抽取空腹肘静脉血液，经离心后分离血清，于-20℃冰箱保存，批量检测。检测前室温解冻。CD40（货号：EK0702）、CD40L（货号：EK0573）和 MMP-9（货号：EK0465）ELISA检测试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。按照试剂盒操作说明书进行操作，采用UQUANT全波长酶标仪（美国Bio-Tek公司），检测波长为450nm，校正波长为570nm，每个样品设3个复孔，所得OD值通过CurveExpert1.3软件换算成样品浓度。

1.3 统计学处理

应用SPSS 16.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间均数比较采用方差分析，两两比较采用t检验；两指标值的相关性分析采用Pearson相关系数（r）法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同程度CIMT高血压患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及与CIMT的相关性分析

如表1所示，各CIMT组血清CD40、CD40L和MMP-9水平均显著高于对照组，并且随着CIMT程度的增加，患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平逐渐增高，各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）。相关性分析显示，血清 CD40、CD40L和MMP-9水平与CIMT间均呈显著正相关，r值分别为0.989，0.996和0.992（P 均＜0.05）。

表1 不同程度CIMT高血压患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表1 不同程度CIMT高血压患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：与对照组比较，1）P＜0.01；与 CIMT正常组比较，2）P＜0.01；与 CIMT增厚组比较，3）P＜0.01

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2.2 不同PI分级高血压患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及与PI的相关性分析

如表2所示，随着颈动脉PI级别的增加，CD40、CD40L和MMP-9的浓度逐渐增高，各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）。相关性分析显示，高血压患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平与其PI分级呈显著正相关，r值分别为0.983、0.991和0.985（P 均＜0.05）。

3 讨 论

颈动脉彩色多普勒超声检查是目前诊断CAS的首选方法，可清晰显示血管CIMT、斑块数量及大小等。PI与心脑血管疾病的发生密切相关，临床将其作为衡量CAS程度的指标。流行病学研究［6］表明，若无症状人群的CIMT＞1.00mm，冠心病发病率可明显增高，是早期识别高危人群CAS的可靠指标之一。PI作为评估颈动脉粥样斑块形成的直接指征，能定量检测CAS斑块大小和数量［7］。

表2 不同PI分级患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表2 不同PI分级患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：与PI 0级组比较，1）P＜0.01；与PI 1级组比较，2）P＜0.01；与 PI 2级组比较，3）P＜0.01

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CAS性狭窄是缺血性脑卒中的重要危险因素，阐明CAS斑块发生、发展及破裂机制对于寻求有效治疗措施、预防缺血性脑血管病发生至关重要［8］。动脉硬化炎症假说认为动脉硬化是血管壁的慢性炎症，其中有许多炎性介质和炎性细胞参与了这一过程，而作为重要炎症信号的CD40／CD40L也在其中。正常血管内皮细胞低表达CD40，而CAS的内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞均高表达CD40和CD40L。本文结果证实，相对于CIMT正常组和PI0级组，CIMT增厚各组和PI 1-3级组患者CD40和CD40L水平明显增高。CD40／CD40L主要是通过影响一些黏附因子、细胞因子、MMPs等介导CAS的发生和发展［9］，不仅参与粥样斑块的形成，同时也引起粥样斑块不稳定或脱落而产生严重后果。已有动物实验［10］表明，通过降低 CD40／CD40L水平可降低CAS的发生和延缓CAS的进展。

MMP-9是MMPs的重要成员，主要由成纤维细胞、炎性细胞、心肌细胞等合成与分泌。作为AS斑块中炎性细胞产物，参与巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞侵入机体组织。本文结果显示不同程度CIMT和PI分级高血压患者血清MMP-9水平明显高于对照组，且随着CIMT增厚和PI分级增加而逐渐升高。增多的MMP能使粥样斑块的纤维帽萎缩和间质胶原降解，导致粥样斑块不稳定［11］。

综上所述，CD40／CD40L和MMP-9在CAS高血压患者中的变化趋势相同，均与CAS的严重程度显著正相关，表明它们共同参与了CAS的发生和发展；同时提示CD40／CD40L和 MMP-9可能作为CAS防治的靶点，通过降低其水平达到防治CAS的目的。

1 Buchner K，Hnee V，Grafe M，et al.CD40ligand is selectively expressed on CD4+T cells and platelets：implications for CD40-CD40Lsignalling in atherosclerosis［J］.J Pathol，2003，201（2）：288-295.

2 Bellota S，Via D，Canavesi M，et al.HMG-CoA reductase inhibitors reduce MMP-9secretion by macrophages［J］.Arteroscler Thromb Vasc Biol，1998，18（11）：1 671-1 678.

3 Chobaniart AV，Bakris GI，Black HR，et al.The seventh report of the joint national Committee on prevention，detection，evaluation，and treatment of high blood pressure：the JNC7report［J］.JAMA，2003，289（19）：2 560-2 572.

4 杜 丽，邱 健.多种无创检测指标与动脉硬化相关性的临床研究进展［J］.中国实验诊断学，2009，13（5）：708.

5 张小民，宋月霞，刘春荣，等.免疫因子sB7-H3与高血压合并颈动脉粥样硬化［J］.中华高血压杂志，2007，15（9）：756-758.

6 Nambi V，Chambless L，Folsom A，et al.Carotid intima-media thickness and the presence or absence of plaque improves predic-tion of coronary heart disease risk in the atherosclerosis risk in communities（ARIC）study.J Am Coll Cardiol，2010，55（15）：1 600-1 607.

7 Xu Y，Li J，Luo Y，et al.The accocition between ankle-brathial index and candiouascular or all-cause morlatity in metabotic syndrome of eldely chinese［J］.Hypertens Res，2007，30（7）：613-619.

8 武晓玲，赵 瑾，迟路湘.影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的流体力学因素研究进展［J］.微循环学杂志，2007，15（4）：97-99.

9 Wierzbicki AS.Lipid-altering therapies and the progression of atherosclerotic disease［J］.Cardiovasc Intervent Radiol，2007，30（2）：155-160.

10 薛 凌，高夏青，张 扬，等.CD40-CD40L系统对主动脉粥样硬化兔血浆粘附分子水平的影响［J］.中国实用医药，2012，7（23）：134-136.

11 Schonbeck U，Libby P.CD40signaling and plaque instability［J］.Circ Res，2001，89（12）：1 092-1 093.