孟祥艳， 于海龙， 买 霞， 张文成， 徐瑞成

缺氧预处理(hypoxic preconditioning，HPC)是指机体在经受轻度或中度的缺氧刺激后，对后续的严重刺激产生耐受性的一种生物学效应［1］。预处理作为机体内源性保护机制之一，不仅可对抗在体器官的缺血/再灌注(ischemia reperfusion，I/R)损伤，也可对抗离体细胞的缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation，H/R)损伤［2］。然而，HPC的心肌保护机理尚未完全阐明，HPC保护作用及其机制的研究对于临床更好地预防和治疗缺血/缺氧性心脏病具有重要意义。

ZFP580是本组克隆的一种新的C2H2型锌指核转录因子，ZFP580广泛存在于各种大鼠细胞内，并在心肌细胞和内皮细胞的表达量最高［3］。前期实验研究证明ZFP580可能参与维持细胞的正常功能，对细胞的存活和增殖等生理活动具有明显意义［4-5］。在大鼠心肌I/R损伤研究中，L-精氨酸预处理可明显上调大鼠心肌组织中ZFP580的表达并发挥细胞保护作用［6］。据此，本实验旨在通过观察HPC对心肌细胞H/R损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变，探讨ZFP580的作用及相关的信号调控，为进一步揭示HPC的心肌保护机制及ZFP580的功能奠定实验基础。

材料和方法

1 材料

大鼠H9c2心肌细胞株由中国科学院上海细胞研究所提供;胎牛血清(Gibco);高糖 DMEM(Hy-Clone);ZFP580Ⅰ抗(Abcam);β-actinⅠ抗(Sigma);CK-MB含量ELISA检测试剂盒(R＆D);LDH活力生化检测试剂盒(南京建成);Annexin V-PE/7-AAD染色试剂(Invitrogen);其余试剂为国产分析纯。模拟缺血的缺氧培养基配方(mmol/L，pH 6.2):1.0 KH2PO4，10.0 NaHCO3，1.2 MgCl2·6H2O，25.0 HEPES，74.0 NaCl，16.0 KCl，1.2 CaCl2，20.0 Na lactate。

2 方法

2.1 H9c2大鼠心肌细胞的培养 H9c2心肌细胞于含有10%胎牛血清的高糖DMEM、37℃恒温培养箱(5%CO2)中培养，隔天换液，3 d传代1次，各组细胞在实验前8～12 h利用无血清DMEM饥饿使细胞同步化。……