宋利，赵好冬，杜延佳，曲朋，张辉，孙佳明

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

*

张辉，教授，研究方向：中药与天然药物有效成分；E-mail：zhanghui_8080@163.com；

孙佳明，副研究员，研究方向：中药与天然药物有效成分；E-mail：sun_jiaming2000@163.com

一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量测定

宋利，赵好冬，杜延佳，曲朋，张辉*，孙佳明*

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

目的建立一年蓬中焦袂康酸的HPLC含量测定方法，并对一年蓬药材不同部位中焦袂康酸含量进行测定。方法采用Unitary C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)为流动相，检测波长为270 nm，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL·min-1。结果焦袂康酸的线性范围为0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)，平均加样回收率为98.4%，RSD=1.2%(n=6)。一年蓬花、叶、茎中焦袂康酸含量分别为2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中含量低于0.012 mg·g-1。结论该方法简便、准确、重复性好，可以作为一年蓬中焦袂康酸的含量测定方法，为合理利用一年蓬药材提供参考依据。

一年蓬；焦袂康酸；高效液相色谱法

一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]是菊科飞蓬属植物，以全草入药，又名女菀、野蒿、牙肿消、牙根消等。其味甘、苦，性凉，具有解毒，止血，消食，截疟的功能，主治淋巴结炎，齿龈炎，疟疾，消化不良，胃肠炎，血尿，毒蛇咬伤[1]。一年蓬化学成分包括黄酮类[2-3]、萜类和甾醇类[4-6]、有机酸类[7-9]等。其中，一年蓬全草含焦袂康酸[2]。张人伟等[10]研究表明焦袂康酸有升压作用，其葡萄糖苷有降压和镇静催眠作用。李铁军等[11]研究证明灯盏花中焦袂康酸苷(ES)对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用，其抗氧化和抗活性氧作用可能是其保护作用机制之一。孙汉董等[12]研究证明焦袂康酸及其葡萄糖苷具有显著增加脑血管流量，改善脑血循环，降低脑血管阻力，提高血脑屏障的通透性，增加心肌营养回流的作用，同时具备提高机体巨噬细胞免疫功能和较强的抑制内凝血等作用。此外，焦袂康酸也是制备香味增效剂麦芽酚、乙基麦芽酚的重要中间体[13]。目前尚未见有文献报道测定一年蓬不同部位焦袂康酸含量的方法。本研究建立了一年蓬中焦袂康酸的HPLC测定方法，并对一年蓬药材不同部位中焦袂康酸含量进行测定。

1 仪器与材料

1.1 仪器

AgiLent 1260系列高效液相色谱仪，Sartorius BSA124S-CW型电子天平，KQ-3200B型超声波清洗器。

1.2 材料

一年蓬药材采于吉林省蛟河市，经长春中医药大学张辉教授鉴定为菊科飞蓬属一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]的全草。将该药材分拣为花、叶、茎、根，晾干，粉碎，过三号筛，备用。

焦袂康酸对照品为本实验室从一年蓬中分离得到，经波谱分析鉴定结构，HPLC面积归一化法检测纯度>98.0%。甲醇、三氟乙酸为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Unitary C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)，检测波长：270 nm，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，进样量：10 μL。在上述色谱条件下对照品和样品的色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定焦袂康酸对照品0.006 2 g，置100 mL量瓶中，甲醇溶解，定容，摇匀，配制成浓度为0.062 mg·mL-1的焦袂康酸对照品溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取一年蓬花、叶、茎、根粉末各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失质量，摇匀，静置，取上清液，0.45 μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

1.焦袂康酸A.对照品 B.茎 C.花 D.根 E.叶图1 焦袂康酸对照品及一年蓬不同部位HPLC图

2.4 线性关系考察

精密吸取2.2项下对照品溶液0.04，1，4，8，10 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，摇匀。分别吸取10 μL注入色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以浓度为横坐标(Χ)、峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，所得焦袂康酸的回归方程为Y=60.099Χ-14.549(r=0.999 3)。结果表明，焦袂康酸在0.25～62.0 μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取2.2项下对照品溶液1 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，摇匀，按2.1项下色谱条件连续进样5次，测得焦袂康酸峰面积的RSD=0.16%，试验表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

按2.3项下的供试品溶液的制备方法平行制备一年蓬花的供试品溶液5份，按2.1项下色谱条件进样，测定焦袂康酸平均质量分数为2.56 mg·g-1，RSD=1.70%，表明此法重复性良好。

2.7 稳定性试验

精密称取2.3项下制备的一年蓬花供试品溶液，按2.1项下色谱条件每2 h进样1次，进样6次，计算得焦袂康酸峰面积的RSD=0.97%，结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的一年蓬花细粉6份，分别精密加入2.2项下焦袂康酸对照品溶液10 mL，照2.3项下方法制成加样回收供试液，按上述色谱条件依法进行测定，结果见表1。

表1 一年蓬花中焦袂康酸加样回收率试验

2.9 样品含量测定

按2.3项下方法分别制备一年蓬花、叶、茎、根样品溶液各3份，按2.1项下色谱条件进样，测得峰面积，计算焦袂康酸的含量。测得一年蓬花、叶、茎中焦袂康酸的平均质量分数分别为2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中焦袂康酸质量分数低于0.012 mg·g-1。

3 讨论

取甲醇溶解的焦袂康酸对照品溶液，以甲醇为空白，在200～400 nm进行光谱扫描，可见焦袂康酸在270 nm波长处有最大吸收，因此选择270 nm作为检测波长。焦袂康酸为3-羟基-4-吡喃酮，具有弱酸性，经尝试最终选用使峰形较好的甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)作为流动相。

应用本法测定了一年蓬药材不同部位中焦袂康酸的含量，结果显示各部位焦袂康酸含量为花>叶>茎>根，且各部位含量差异较为明显，其中根中几乎不含焦袂康酸，而花中的焦袂康酸含量是叶的6倍左右、茎的30余倍，因此判定花为一年蓬中富含焦袂康酸的主要药用部位。这提示我们在资源可持续利用的原则下，只采收一年蓬的地上部分就可获得该植物中绝大多数的焦袂康酸。本研究建立的方法不仅能够快速准确地测定一年蓬中焦袂康酸的含量，也为一年蓬药材的合理采收和开发利用提供参考依据。

[1] 南京中医药大学.中药大辞典[M].第二版.上册.上海：上海科学出版社，2006：3.

[2] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上册.上海：上海科学技术出版社,1977：3.

[3] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编[M].上册.北京：人民卫生出版社，1996：1.

[4] 李新，张庆康，高坤.一年蓬的化学成分研究[J].西北植物学报，2004，24(11)：2096-2099.

[5] Chikao Nishino，Ritsuko Kimura.Isolation of sex pheromone mimic of the American cockroach by monitoring with male/female ratio in electroantenn-ogram[J].Insect Physiol，1981，27(5)：305-311.

[6] Takeyoshi Iijima，Yasunori Yaoita，Masao Ki kuchi.Fivenew sesquiter penoids and a new diter penoid fromErigeronannuus(L.)Pers.，Erigeronphiladelph-icusL.andErigeronsumairensisRetz[J].Chem Pharm Bull，2003，51(5)：545-549.

[7] Hashitoko，Yasuyuki.Isolation of 5-hhyroxy-α-pyrone and itsβ-D-glucoside from Erigeron and their use as aging inhibitors for plants and glycosidase inhibitor：Jpn，04198177，A2[P].1992-07-17.

[8] V.P.Rudonko，S.M.Tymchuk，O.V.Medvedovskaya，et al.Fatty acid composition of Erigeron species[J].Khim Prir Soedin，1993，(2)：294.

[9] HyuncheolOh，Sunyoung Lee，Ho-Sub Lee，et al.Germi nation inhibitory constituents from Erigeron annuus[J].Phytochemistry，2002，61：175.

[10] 张人伟，杨生元，林詠月.灯盏花的化学成分研究——Ⅰ.焦福康酸及一种新苷的分离、鉴定[J].药学学报，1981，16(1)：68-69.

[11] 李铁军，芮耀诚，邱彦，等.灯盏花中焦袂康酸苷抗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究[J].药学服务与研究，2001，1(1)：28-30.

[12] 孙汉董，岳建明，陈玉磐，等.焦袂康酸及其葡萄糖苷(飞蓬苷)在制药中的应用：中国，1136435A[P].1996.

[13] 沙靖全，于文锦，李锦州.乙基麦芽酚合成的进展[J].化学工程师，2001，87(6)：38-39.

DeterminationofPyromeconicacidinDifferentPartsofErigeronannus

SONGLi，ZHAOHaodong，DUYanjia，QUPeng，ZHANGHui*，SUNJiaming*

(ChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China)

Objective：To establish a method for the determination of pyromeconic acid inErigeronannusby HPLC，and determine the contents of pyromeconic acid in different parts ofE.annus.MethodsUnitary C18column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used with a mobile phase consisting of methanol-1‰ trifluoroacetic acid aqueous(5∶95).The detection wavelength was 270 nm.Column temperature was 30 ℃.The flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe linear range of pyromeconic acid was 0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)and The mean recoveries rate was 98.4 %，RSD 1.2%(n=6).The contents of Pyromeconic acid in flower，leaf，stem were 2.56，0.40，0.08 mg·g-1，while root was lower than 0.012 mg·g-1.ConclusionThe method is simple，accurate，reproducible，and can be used as the determination method of pyromeconic acid inE.annus，and meanwhile，can provide reference basis for the rational use ofE.annus.

Erigeronannus；Pyromeconic acid；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.006

2014-01-16)