刘丹丹，魏志雄

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)

牛大力水提物抗炎镇痛作用的实验研究

刘丹丹*，魏志雄

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)

目的研究牛大力水提物的抗炎镇痛作用。方法通过二甲苯诱发小鼠耳肿胀实验、腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验和大鼠棉球肉芽实验观察牛大力水提物的抗炎作用；采用醋酸扭体法和热板刺激法观察牛大力水提物的镇痛作用。结果牛大力水提物能减轻二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀度，抑制醋酸所致腹腔毛细血管通透性的增高，对大鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用，并能减少醋酸所致小鼠的扭体次数和提高小鼠对热刺激的痛阈值。结论牛大力水提物对急、慢性炎症均有抑制作用，对热和化学刺激引起的疼痛反应有明显的镇痛作用。

牛大力；水提取物；抗炎作用；镇痛作用

牛大力为我国南方地区习用的中药材，豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤MillettiaspeciosaChamp.的干燥根，又叫山莲藕、大力薯，性味甘、平，归肺、肾经，具有补虚润肺、强筋活络的功效，在两广地区常作为煲汤原料药，是一种食药两用的岭南特色药物。临床证明其对多种慢性疾病有治疗作用，如腰

肌酸痛、跌打损伤、风湿性关节炎、肺结核、慢性支气管炎、慢性肝炎等均有一定疗效[1-2]。目前尚未见有关牛大力水提物抗炎镇痛作用的系统报道，为此本实验在前期研究的基础上[3-5]，通过建立动物炎症和疼痛模型，对牛大力水提取物开展了抗炎镇痛作用的药效学实验研究。

1 材料与仪器

1.1 动物

SPF级KM小鼠，体重18～22 g，实验动物质量合格许可证号：SCXK(粤)2008-0002(44007200003653)；SD大鼠，体重120～150 g，实验动物质量合格许可证号：SCXK(粤)2008-0002(44007200003654)，均由广东省医学实验动物中心提供。动物正常饲养3 d后供试。

1.2 受试药物

牛大力(广州致信中药饮片有限公司，批号：100701)。牛大力水提物制备：采用水煎法自制，取适量牛大力干燥药材，用8倍体积的蒸馏水浸泡1 h，加热煮沸2 h，趁热滤取药液；残渣再加6倍量蒸馏水，煮沸1 h，合并两次滤液，浓缩至1 g生药·mL-1备用，使用时用新鲜蒸馏水稀释至所需给药浓度。

吲哚美辛肠溶片(广东华南药业有限公司，批号：121101)；36%乙酸(广州化学试剂厂，批号：20110801-2)；二甲苯(广州化学试剂厂，批号：20040704-2)。

1.3 仪器

UV2550型紫外可见分光光度计(日本Shimadzu公司)，YLS-6B智能热板仪(山东省医学科学院设备站)，BP211D型电子分析天平(德国Sartorius公司)。

2 方法

2.1 牛大力水提物抗炎作用实验

2.1.1 对小鼠耳廓肿胀的影响[6]取KM小鼠60只，雌雄各半，随机分为5个组：空白组，阳性对照组，牛大力水提物高(20 g·kg-1·d-1)、中(10 g·kg-1·d-1)、低(5 g·kg-1·d-1)剂量给药组。阳性药按吲哚美辛肠溶片溶液0.01 g·kg-1·d-1灌胃，空白组给予等容积蒸馏水，连续4 d。于末次给药后1 h，将二甲苯20 μL滴于各小鼠右耳两面致炎，左耳不涂作为对照。致炎20 min后小鼠颈部脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，精密称重，以左、右耳片重量之差作为肿胀度，比较各组间差异。

2.1.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[7]分组和给药方法同2.1.1。于末次给药后1 h，各鼠尾静脉注射1%伊文思蓝0.9%氯化钠溶液10 g·kg-1体重，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只，20 min后小鼠脱颈椎处死，剪开腹腔，用5 mL 0.9%氯化钠溶液冲洗腹腔数次，收集洗液，1 000 r·min-1离心5 min，取上清液用紫外分光光度计于590 nm处测吸光度(A)，比较各组间差异。

2.1.3 对大鼠棉球肉芽肿的影响[6]取SD大鼠60只，雌雄各半，体重为180～220 g，随机分成5组：空白组，吲哚美辛阳性对照组(0.005 g·kg-1·d-1)，牛大力水提物高(10 g·kg-1·d-1)、中(5 g·kg-1·d-1)、低(2.5 g·kg-1·d-1)剂量给药组。在乙醚浅麻醉下，腹部去毛消毒，将灭菌棉球[每个棉球重(25±0.5) mg，高压灭菌，每个各加入氨苄青霉素1 mg·(0.1 mL)-1，50 ℃烘干]植入大鼠皮下，然后缝合。术后次日开始给药，空白对照组给等量的饮用水，连续10 d。第11天脱颈椎处死大鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放在烘箱里60 ℃烘干12 h后称重，将称得的重量减去棉球重量即得棉球肉芽肿重量，比较各组差异。

2.2 牛大力水提物镇痛作用实验

2.2.1 对醋酸所致小鼠疼痛的影响[8]分组和给药方法同2.1.1。于末次给药后1 h，每组每只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2 mL，记录注射醋酸后15 min内小鼠的扭体次数，比较各组间差异。

2.2.2 对热刺激所致小鼠疼痛的影响[8]取KM雌性小鼠，将其置于恒温(55±0.5)℃的热板测痛仪上，用秒表记录小鼠出现舔后足的时间(s)作为给药前痛阈值，选取60只痛阈值5～30 s的合格小鼠，分组和给药方法同2.1.1，连续给药3 d，于末次给药后1 h再测定各小鼠的痛阈值，观察时间为60 s。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 对小鼠耳廓肿胀的影响

牛大力水提物各给药组均能减轻二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度，高剂量组效果明显，与空白组相比差异具有统计学意义(P<0.05)，提示牛大力水提物对急性炎性肿胀具有抑制作用。见表1。

表1 牛大力水提取物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；下同

3.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

牛大力水提物高、中剂量组可明显减少醋酸所致的小鼠腹内炎性物质的渗出，抑制毛细血管通透性的增高，与空白组相比差异有统计学意义(P<0.01或0.05)，提示牛大力水提物对炎性过程中毛细血管通透性增高具有一定的抑制作用。见表2。

表2 牛大力水提物对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

3.3 对大鼠棉球肉芽肿的影响

牛大力水提物高、中、低剂量组均可明显减轻大鼠棉球肉芽的净重，与模型组比较均有统计学意义(P<0.05或0.01)，低剂量组效果最好，其肉芽抑制率与阳性对照组相当，提示牛大力水提物具有抑制大鼠肉芽肿增重的抗炎消肿作用。见表3。

表3 牛大力水提物对大鼠棉球肉芽肿抑制的影响

3.4 对醋酸所致小鼠疼痛的影响

牛大力水提物高、中、低剂量组均可减少醋酸所致小鼠15 min内的扭体次数，其中高、中剂量组效果明显，与空白组相比差异有统计学意义(P<0.01)，提示牛大力有较强的镇痛作用。见表4。

表4 牛大力水提物对醋酸所致小鼠疼痛的影响

3.5 对热刺激所致小鼠疼痛的影响

牛大力水提物高、中剂量组可明显提高小鼠痛阈值，延长小鼠痛阈时间，与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)，提示牛大力有较强的镇痛作用。见表5。

表5 牛大力水提物对热刺激所致小鼠疼痛的影响

4 讨论

炎症是许多疾病的基本病理过程，其基本病理变化为局部微血管反应和血液成分的渗出，局部临床特征是红肿热痛和功能障碍。炎症发生发展过程一般分为3期，早期以毛细血管扩张、通透性亢进为主，中期为血小板吸附及白细胞游走，晚期为肉芽组织增生[7]。本实验主要从炎症的早期和晚期入手研究牛大力水提取物的抗炎作用。实验结果表明牛大力水提取物可减轻二甲苯引起的小鼠耳肿胀，在以血管通透性为主要改变的急性炎症模型中，能明显抑制醋酸所致小鼠急性腹膜炎的毛细血管通透性，说明牛大力水提物对炎症反应早期的急性渗出性肿胀有明显抑制作用，能有效对抗急性炎症。在以肉芽组织增生为指标的慢性炎症模型实验中，牛大力水提物能够显著抑制异物所致大鼠炎症的肉芽增生，但没有表现出明显的量效关系，说明牛大力水提物对异物所致大鼠炎症肉芽增生的抑制作用具有最佳作用剂量，并非剂量越大越好。

本实验研究镇痛的动物模型采用了醋酸致痛小鼠扭体实验及热板实验。扭体实验是常用来筛选非甾体类抗炎药镇痛作用的一种敏感而简便的方法，与外周神经镇痛有很大的关系，常用一些化学刺激物如强酸等给入动物体内造成疼痛模型。热板实验是常用于筛选中枢镇痛药的一种动物模型，中枢镇痛药可相对延长热板刺激的反应时间，而外周镇痛药则不能，主要通过对动物施加一定的伤害性刺激如热、电等引起疼痛反应。牛大力水提物在这两个模型中均表现出较好的镇痛作用，能够显著减少醋酸致痛小鼠的扭体次数，明显提高热刺激致痛小鼠的痛阈值，表明牛大力水提取物对物理和化学因素引起的疼痛均有明显的对抗作用，具有一定的外周镇痛及中枢镇痛作用，可缓解临床炎症反应引起的疼痛。

综上所述，牛大力水提取物具有抗炎镇痛作用，为临床用于炎症反应提供了实验依据，但关于其药理作用机制可能是多方面的，尚有待于进一步探讨。

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ExperimentalStudiesontheAnti-inflammatoryandAnalgesicEffectsoftheWaterExtractfromMillettiaeSpeciosaeRadix

LIUDandan*，WEIZhixiong

(Dongguan Institutes For Food And Drug Control，Dongguan 523109，Guangdong)

Objective：To study the anti-inflammatory and analgesic effects ofMillettiaeSpeciosaeradix water extract.MethodsAnti-inflammatory effects were determined by xylene induced ear acute inflammatory edema，capillary permeability of peritoneal and granuloma induced with cotton ball in mice.Analgesic effects were observed by acid causing body distortion test and action to pain caused by heat in mice.ResultsThe water extract ofM.Speciosaeradix resisted the swelling of pinna of mice caused by xylene and capillary permeability of peritoneal in mice，with depressant effect on the tampon granuloma obviously.In addition，it could decreased the times of stretching and raised the pain threshold.ConclusionThe water extract fromM.Speciosaeradix manifested obvious anti-inflammatory effects on acute and chronic inflammatory reactions.The pain reactions induced by heat and chemical stimulus were significantly relieved by the water extract ofM.Speciosaeradix.

MillettiaeSpeciosaeradix；Water extract；Anti-inflammatory effect；Analgesic effect

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刘丹丹，主管中药师，研究方向：药品检验；Tel：(0769)22017096，E-mail：269517874@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.005

2014-03-31)