周天浩，徐京，牟艳英，李晋生，解素花*

(1.北京中研同仁堂医药研发有限公司，北京 100079；2.北京同仁堂科技发展股份有限公司，北京 100079)

仙灵脾益源胶囊提取工艺研究△

周天浩1，2，徐京2，牟艳英1，2，李晋生1，2，解素花2*

(1.北京中研同仁堂医药研发有限公司，北京 100079；2.北京同仁堂科技发展股份有限公司，北京 100079)

目的：研究筛选仙灵脾益源胶囊的最佳提取工艺。方法：采用正交试验设计，以淫羊藿苷和总黄酮为考察指标，对影响仙灵脾益源胶囊提取工艺的各因素进行研究。结果：仙灵脾益源胶囊最佳提取工艺为淫羊藿、骨碎补进行醇提，70%乙醇提取3次，每次用12倍量溶剂，提取1 h。结论：该法提取工艺具有较好的效果，提取工艺合理可行，可为工业化生产提供依据。

仙灵脾益源胶囊；淫羊藿苷；总黄酮；正交试验设计

仙灵脾益源胶囊是针对骨质疏松症的高危和发病人群，主要为绝经后妇女和中老年人开发的具有辅助增强骨密度的保健食品。以中医辨证论治思想为基础，以骨质疏松常见证型脾肾阳虚、肝肾阴虚和气滞血瘀为重点研究对象，从健脾温阳、滋肾益肝、补精益髓、行气活血入手来全面调理，补肝肾，强筋骨，益精髓，健脾益气，活血通络，增强脏腑功能，提高身体免疫力，降低骨质流失，调节骨代谢平衡，增加骨密度，有效改善骨质疏松症状。配方中淫羊藿味辛、甘，性温，归肝、肾经，有补肾阳，强筋骨，祛风湿功能，具有促进骨髓细胞DNA合成的作用[1-3]。骨碎补味苦性温，归肝、肾经，有疗伤止痛，补肾强骨功能，用于跌扑闪挫，筋骨折伤，肾虚腰痛，筋骨痿软，耳鸣耳聋，牙齿松动，能促进骨对钙的吸收，提高血钙和血磷水平，有利于骨折的愈合，推迟骨细胞的退行性病变[1，4-5]。上述两药为治疗骨质疏松症之要药，在仙灵脾益源胶囊方中为君药。以淫羊藿苷和总黄酮为指标性成分，研究其复方饮片的提取工艺，从而优化出合适提取工艺，为工业化生产提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1100 series高效液相色谱仪(安捷伦公司)，DZF06050型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)，AB135-S电光分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料

淫羊藿苷、芦丁对照品(中国食品药品检定研究院)，淫羊藿、骨碎补(购于安国市罗深行中药材有限责任公司)。

聚酰胺粉(柱层析80～100 目)；乙腈(色谱纯)，纯净水(微孔滤膜滤过，0.45 μm)，乙醇(分析纯)，甲醇(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 淫羊藿苷测定

2.1.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为waters symmetry C18柱(150 mm×4.6mm，5 μm)；以乙腈-水(30∶70)为流动相，柱温30 ℃；检测波长为250 nm。理论板数按淫羊藿苷[1]峰计算应不低于4 000。

2.1.2 标准曲线的制备 精密称取淫羊藿苷3.9 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度配置成储备液。分别精密称取储备液0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，取10 μL进样，测定峰面积。进行线性回归，得方程Y=13 063X+1.404 2，r=1.000。结果表明淫羊藿苷在39～312 μg·mL-1呈良好的线性关系。

2.1.3 供样品溶液的制备及测定 取本品粉末(过50目)约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理1 h，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 总黄酮测定

2.2.1 标准曲线的制备 精密称取芦丁15 mg于500 mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度配置成储备液。分别精密称取储备液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360 nm比色。进行线性回归，得方程Y=3.927 1X+0.000 6，r=0.998 6。结果表明总黄酮在30～150 μg·mL-1呈良好的线性关系。

2.2.2 供样品溶液的制备及测定 取本品粉末约1.0 g，加甲醇定容至25 mL，摇匀后，超声提取20 min，放置，吸取上清液1.0 mL，于蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20 mL苯洗，弃去苯液，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25 mL。此液于波长360 nm测定吸收值。根据线性回归方程，计算试样中总黄酮含量[6]。

2.3 正交试验

淫羊藿和骨碎补都是常用中药，其中淫羊藿有效成分为淫羊藿苷等黄酮类成分，骨碎补有效成分为总黄酮类化合物。本产品以淫羊藿苷和总黄酮为标志性成分，采用乙醇提取可取得较好效果。由于醇提具有设备普及、成本低廉、生产场地要求不高、容易操作的特点，适合工业化大生产；同时醇提方法在工业上一般采用热回流法，可保留有效成分，达到去粗取精的目的。选用L9(34)正交设计，考察提取溶剂用量、乙醇浓度、提取时间、提取次数的具体工艺参数，以淫羊藿苷和总黄酮两项指标的综合评分来筛选最佳的提取工艺。综合评分=淫羊藿苷总量+总黄酮总量。按仙灵脾益源胶囊配方中的饮片比例投料88 g,进行正交试验，每项实验均做2个平行，取平均值进行分析。正交试验因素水平表见表1，正交试验设计及结果见表2，方差分析见表3。

通过表2直观分析，表明4种因素对淫羊藿苷和总黄酮提取的综合评分影响程度依次为：B>A>C>D，其优化组合为A3B2C1D3。表3方差分析显示，乙醇浓度和溶剂用量对综合评分影响有统计学意义(P<0.01)，提取时间和提取次数对综合评分的影响不具有统计学意义。结合直观分析和方差分析结果，最后优选提取条件为：70%乙醇提取3次，每次用12倍量溶剂，提取1 h。

表1 仙灵脾益源胶囊提取工艺正交试验因素水平表

表2 仙灵脾益源胶囊提取工艺正交试验

表3 仙灵脾益源胶囊提取工艺方差分析

注：(1)n=2，(2)F(2，2)=19.0

2.4 验证实验

为确证工艺的稳定性，根据筛选出的最佳提取条件进行验证实验，3批实验结果见表4。结果表明，所筛选的提取工艺条件基本稳定。

3 讨论

淫羊藿、骨碎补为仙灵脾益源胶囊的君药，两者相辅相成，对于发挥整个组方的药效具有决定性的作用，以淫羊藿苷、总黄酮为提取工艺的指标，并以二者的综合评分作为筛选最佳工艺的依据，具有代表性和科学性。

实验通过正交设计法对仙灵脾益源胶囊提取工艺进行优选，以淫羊藿苷和总黄酮的综合评分为考察指标，并考虑了节省能源和时间问题。按优选工艺进行验证实验，结果稳定性较理想，可为工业化生产提供参考依据。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：306-308，239-240.

[2] 谭清武.骨质疏松症临床验方用药规律探析[J].中医研究，2004，17(3)：2-3.

[3] 赵丽娜.淫羊藿防治骨质疏松临床效果评价[J].现代中西医结合杂志，2003，12(9)：922-923.

[4] 咎强，朱超.强骨汤治疗肾虚型骨质疏松症56例[J].陕西中医，2006，(8)：957-959.

[5] 黄永明，许少健.骨松安胶囊治疗绝经后骨质疏松症34例[J].陕西中医，2006，(27)：954-956.

[6] 卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003：308.

Study on the Extraction Process of Herba Epimedii Yiyuan Capsule

ZHOU Tianhao1，2，XU Jing2，MOU Yanying1，2，LI Jinsheng1，2，XIE Suhua2*

(1.BeijingZhongyanTongrentangChineseMedicineR&DCo.，Ltd.，Beijing100079，China；2.BeijingTongRenTangTechnologiesCo.，Ltd.，Beijing100079，China)

Objective：Study and choose the best extraction process of Herba Epimedii Yiyuan capsule.Methods：Use the orthogonal experimental design，the indexes icariin and flavonoids，to study the factors affecting the extraction process of Herba Epimedii Yiyuan capsule.Results：Extract the epimedii folium and the drynariae rhizome 3 times with 70% ethanol.And these two herbal medicines are extracted for one hour each time with 12 times volume solvent.Conclusion：This method has good effect on the extraction which is reasonable and feasible.Moreover，this method can also be the basis for industrial production.

Herba Epimedii Yiyuan Capsule；Icariin；Flavonoids；Orthogonal experimental design

国家高技术研究发展计划(863计划)(SQ2009AA02XK1487510)

*[通信作者] 解素花，高级工程师，研究方向：中药复方新药开发；Tel：(010)87632553，E-mail：kjyr123@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.01.013

2013-07-22)