王星，张璐萍

（1.山东省莱芜市人民医院 骨一科，山东 莱芜 271100；2.滨州医学院 神经生物学研究所，山东 滨州 256603）

西洛他唑对骨折创伤术后下肢静脉栓塞患者血浆中血小板相关指标的影响

王星1，张璐萍2

（1.山东省莱芜市人民医院 骨一科，山东 莱芜 271100；2.滨州医学院 神经生物学研究所，山东 滨州 256603）

目的探讨西洛他唑对骨折创伤术后下肢静脉栓塞患者血浆中血小板相关指标的影响。方法选择2012年2月～2013年7月就诊于莱芜市人民医院的104例骨折创伤术后下肢静脉栓塞患者为研究对象，随机分为A、B 2组，每组52例。2组均给予常规护理，A组加用西洛他唑，B组加用阿司匹林选取同期来本院进行体检的50例健康人员作为对照（C组）。分析各组患者血浆中血小板相关指标的变化。结果治疗前A、B 2组血浆中IL-6和IL-8均显著高于C组（P＜0.01），治疗后，2组IL-6和IL-8水平均显著降低（P＜0.01），但2组组间比较差异无统计学意义。治疗前A、B 2组血浆中CRP、FIB和D-D含量均显著高于C组（P＜0.01，P＜0.05），治疗后2组CRP、FIB和D-D含量均显著降低（P＜0.01，P＜0.05），A组CRP较B组含量更低，差异有统计学意义（P＜0.05），A组FIB和D-D含量与B组无差异。治疗前A、B两组PDW、PLT、MPV和P-LCR含量均显著高于C组（P＜0.01，P＜0.05），治疗后2组PDW、PLT、MPV和P-LCR均显著降低（P＜0.01，P＜0.05），但2组组间比较差异无统计学意义。治疗前A、B 2组血小板活化率均显著高于C组（P＜0.01），治疗后，2组血小板活化率均显著降低（P＜0.01），但2组间比较差异无统计学意义。结论西洛他唑可通过降低炎性因子的表达、降低D-二聚体和纤维蛋白原的水平以及通过影响血小板相关指标降低血小板的活化，从而发挥抗血栓作用。

西洛他唑；血小板；静脉栓塞

静脉血栓为临床上三大血栓性疾病之一，是骨折创伤术后 常见的并发症［1］，其发病率约占下肢骨折手术的50%［2-3］，若不能及时发现与治疗，则易引起肺血栓症（pulmonary thrombosis，PTE）［4］，导致下肢青肿长期处于病废状态而截肢，严重者可导致死亡。静脉血栓的好发部位是下肢，约是上肢发病率的10倍，其发病的3大因素有静脉内膜损伤、血流缓慢和血液高凝，目前仍无良好的治疗方法［5］。西洛他唑本质为磷酸二脂酶-3抑制剂，据报道，西洛他唑具有强大的抗血小板凝集作用［6］，本研究以就诊于莱芜市人民医院的下肢静脉栓塞患者为研究对象，对比研究西洛他唑对该疾病的缓解作用，以期为临床用药提供一定的理论依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选择2012年2月～2013年7月就诊于莱芜市人民医院骨科的104例骨折创伤术后下肢静脉栓塞患者，经过彩色多普勒超声仪检查确诊。随机分为西洛他唑组（A组）52例，其中男29例，女23例，平均年龄（47.4±18.3）岁；阿司匹林组（B组）52例，其中男28例，女24例，平均年龄（49.4±16.3）岁。C组50例为来本院进行体检的健康人员，其中男27例，女25例，平均年龄（48.4±17.3）岁。入选的患者无心、肝、肾及其他血液系统疾病，女性排除月经期，所有患者近期无使用抗凝血药物，发病在7 d以内，所有实验人员均签署知情同意书，本研究获得伦理委员会批准。3组患者年龄、性别差异无统计学意义；A组中血栓分型有中央型14例、周围型25例以及混合型13例，B组中央型13例、周围型26例以及混合型13例，C组中央型14例、周围型24例以及混合型12例，3相比较差异无统计学意义。

1.2 治疗方法 A、B 2组收诊后均给予常规护理，在此基础上A组给予西洛他唑（万特制药有限公司，国药准字H20066511，规格：50mg／片）100 mg／次，2次／d；B组给予阿司匹林（拜耳医药保健有限公司）200 mg／天，治疗5 d。患者均于治疗前后使用EDTA-Na2负压抗凝采血管采集静脉血，使用低速冷冻离心机离心，分离得到血浆，置－80℃冰箱保存备用。C组以相同方法采集全血及分离血浆，与A、B组置于一处保存。

1.3 实验方法

1.3.1 放射免疫法检测血浆中IL-6、IL-8的水平：利用GC-1200双探头γ免疫计数器（厦门中佳光电科技有限公司），采用平衡法对样品进行测定，即将待测样品与抗血清及标记抗原进行竞争性反应，然后加入免疫分离剂，分离抗原-抗体复合物，测定其放射性，计算结合率，根据标准曲线计算样品浓度。

1.3.2 C-反应蛋白水平测定：C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）采用颗粒增强免疫透射比浊法进行测定，按照试剂盒［德赛诊断系统（上海）有限公司］操作说明书进行检测，原理即样品中CRP与抗人CRP抗体包被的乳胶颗粒进行抗原-抗体反应，反应结束后，使用LX20全自动生化分析仪（美国贝克曼公司）进行结果分析。

1.3.3 纤维蛋白原和D-二聚体含量测定：纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）含量采用纤维蛋白原检测试剂盒（clauss改进法）进行检测，原理即凝血酶与待测血浆中FIB进行反应，从而使FIB转化为纤维蛋白，血浆凝固。利用血浆中FIB的含量与凝血时间呈负相关，对照标准曲线，得出纤维蛋白原的浓度。D-二聚体（D-D）含量测定根据试剂盒（标准品、质控品及测定试剂盒均购自美国德灵公司）说明使用CA-1500全自动血凝分析仪（日本Sysmex公司）进行检测。

1.3.4 血小板相关指标检测：将采集得到的已经抗凝的A、B、C组外周静脉全血，采用XE-2100全自动血细胞分析仪（日本Sysmex公司）进行血小板计数（platelet count，PLT）、大血小板比率（platelet larger cell ratio，P-LCR）、血小板平均体积（mean platelet volume，MPV）、血小板分布宽度（platelet distribution width，PDW）检测，所有检测试剂和标准品均购自日本Sysmex公司。

1.3.5 流式细胞仪检测血小板活化状态 取A、B组治疗前后及C组静脉抗凝全血各5mL于试管中，加入CD41-FITC和CD62p-PE抗体，室温避光孵育20 min，3 h内上流式细胞仪（FACSCalibur，美国 Becton Dickinson公司）检测。

2 结果

2.1 治疗前后3组血浆中IL-6、IL-8的水平比较 治疗前A、B组血浆中IL-6和IL-8均显著高于C组（P＜0.01），治疗后2组IL-6和IL-8水平均显著降低，与治疗前相比差异均有统计学意义（P＜0.01）。而A、B 2组之间IL-6和IL-8水平差异无统计学意义（见表1）。

表1 治疗前后3组血浆中IL-6、IL-8的水平比较Tab.1 Comparison of IL-6，IL-8 levels in three groups before and after plasma treatment

2.2 治疗前后3组血浆中CRP、FIB和D-二聚体含量比较

治疗前，A、B 2组血浆中CRP、FIB和D-D含量均显著高于C组（P＜0.01，P＜0.05）。经相应治疗后，CRP、FIB和 D-D含量均显著降低，与治疗前相比差异均有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。治疗后A组CRP较B组含量低，差异有统计学意义（P＜0.05）。而A、B 2组治疗后FIB和D-D含量差异无统计学意义。

表2 治疗前后3组血浆中CRP、FIB和D-二聚体含量比较Tab.2 Comparison of CRP，FIB and D-D levels in three groups before and after plasma treatment

2.3 治疗前后3组血小板相关指标比较 治疗前A、B 2组 PDW、P-LCR、PLT、MPV含量均显著高于 C组（P＜0.01，P＜0.05）。经相应治疗后，PDW、P-LCR、PLT和 MPV均显著降低（P＜0.01，P＜0.05）。治疗后A组CRP较B组含量低，差异有统计学意义（P＜0.05）。而 A、B 2组治疗后 PDW、P-LCR、PLT和MPV差异无统计学意义。

表3 治疗前后3组血小板相关指标的变化比较Tab.3 Changes of platelet-related indicators before and after plasma treatment in three groups

2.4 治疗前后3组血小板活化情况比较 流式结果显示：治疗前，A、B 2组血小板活化率均显著高于C组（P＜0.01），经相应治疗后，血小板活化率显著降低（P＜0.01），而A、B 2组治疗后活化率差异无统计学意义（见图1、图2）。

图1 治疗前后3组血小板的活化情况比较Fig.1 Comparision of platelet activation detected by flow cytometry before and after plasma treatment in three groups

图2 3组血小板活化率比较＃＃P＜0.01，与 C组相比；**P＜0.01，与治疗前相比Fig.2 Comparision of platelet activation rates in three groups＃＃P＜0.01，compared with group C；**P＜0.01 compared with before treatment

3 讨论

人体静脉血液正常情况下处于凝血-抗凝的动态平衡状态，一旦血液中的成分发生变化或者静脉内皮细胞受到损伤，静脉的抗血栓形成功能即受到严重影响，导致血栓形成危机。炎性细胞在该过程中被激活，产生炎性因子，如IL-6和IL-8［7-8］，他们可使纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）沉积并且能够抑制纤溶，不仅如此，炎性因子还可激活血小板［9］，进一步促进血栓的形成。本研究检测了CRP、IL-6和IL-8的表达，结果显示静脉血栓患者血浆中这些炎性因子的含量均明显高于正常人群，经西洛他唑治疗后，CRP、IL-6和IL-8的含量均显著降低，且西洛他唑对CRP的降低效果优于阿司匹林，提示西洛他唑可减轻血栓的炎性症状。

FIB是凝血因子的指标，受到很多因素的影响，其中包括炎性因子［10-11］。本研究发现静脉血栓患者治疗前FIB的水平显著高于正常人群，经西洛他唑治疗后，水平有一定程度的降低，这可能与西洛他唑降低血液中炎性因子的水平相关，但具体机制还有待进一步研究。血液中D-二聚体水平的升高，可反映纤溶系统的活性，更揭示了凝血过程的发生［12-13］。根据研究报道，D-二聚体的水平在严重创伤后可显著升高，与血栓形成并发症密切相关［14-15］。本研究表明西洛他唑能够降低D-二聚体的浓度，提示该药物对静脉血栓有一定的效果。

本实验继续检测了血小板的P-LCR、PDW、PLT和MPV，结果显示治疗前，其均有不同程度的升高，提示治疗前血小板处于高度活化状态，这项结果与流式细胞仪检测血小板活化情况结果相一致。治疗后P-LCR、PDW、PLT和 MPV均有一定程度的降低，而流式细胞仪检测血小板的活性亦有一定程度的降低，表明，西洛他唑可降低血小板活性，其机制有待进一步研究。

综上所述，西洛他唑可通过降低炎性因子的表达、降低D-二聚体和纤维蛋白原的水平以及通过影响血小板的相关指标而降低血小板的活化，从而发挥抗血栓作用。

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（编校：吴茜）

Effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in trauma fractures patients w ith postoperative venous thrombosis

WANG Xing1，ZHANG Lu-ping2

（1.First Department of Orthopaedics，Laiwu City People's Hospital of Shandong Province，Laiwu 271100，China；2.Institute of Neurobiology，Binzhou Medical College，Binzhou 256603，China）

ObjectiveTo evaluate the effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in trauma fractures patients with postoperative venous thrombosis.Methods104 cases of trauma fractures patientswith postoperative venous thrombosis from February 2012 to July 2013 in Laiwu City People's Hospitalwere collected and random ly divided into group A and group group B，each had 52 cases Two groupswere given conventional nursing，and group A were added cilostaeol group B were added aspirin.Other50 cases of currenthealthy people formedical examination were selected for controls（group C）.The effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in each treatment group were analyzed.Result Before treatment，the levels of IL-6 and IL-8 in group A and Bwere significantly higher than group C（P＜0.01），but there is no difference between group A and B.The plasma CRP，FIB and DD in group A and B were significantly decreased than group C（P＜0.01，P＜0.05）.After appropriate treatment，the levels of CRP，FIB and DD in group A and B were significantly reduced than pre-treatment（P＜0.01，P＜0.05）.CRP content in group A was lower than that in group B，the differencewas statistically significant（P＜0.05），FIB and DD in group A showed no differencewith group B.Before treatment，PDW，PLT，MPV and P-LCR in group A and B were significantly higher than group C（P＜0.01，P＜0.05）.After appropriate treatment，the levels of PDW，PLT，MPV and P-LCR in two groups were significantly decreased（P＜0.01，P＜0.05），but there was no difference between two groups.Before treatment，the expression of platelet activation in group A，B were significantly higher than group C（P＜0.01），but significantly reduced after appropriate treatment（P＜0.01），and the difference between the two groups was not statistically significant.ConclusionCilostazol could reduce the expression of inflammatory factors，levels of D-dimer and fibrinogen and platelet related indicators by reduced platelet activation，which plays antithrombotic effect.

cilostazol；platelet；vein thrombosis

R683

A

1005－1678（2014）04－0134－04

山东省高校科技计划（J11LF55）

王星，男，硕士，副主任医师，研究方向：创伤骨科，E-mail：laiwuwangxing＠163.com。