章 艳，苏 慧，苏云明

(黑龙江中医药大学，哈尔滨 150040)

蝙蝠葛酚性碱(PAMD)是从北豆根中提取的活性成分.研究证实PAMD具有抗心律失常、抗脑缺血、抗心肌缺血和抗炎镇痛等[1-3]方面的药理作用.前期对蝙蝠葛酚性碱抗肿瘤作用进行研究，发现不同浓度蝙蝠葛酚性碱对SGC-7901细胞的增殖具有明显抑制作用，抑制作用与浓度呈正相关[4].本文旨在研究蝙蝠葛酚性碱对胃癌相关基因的影响，为临床上胃癌的治疗提供理论和实验依据.

1 实验材料

1.1 人胃癌细胞株SGC-7901

来源：凯基生物，货号：KG026.

1.2 实验药物

蝙蝠葛酚性碱(PAMD)：由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供.将 PAMD用一定量的DMSO溶解后用PBS定容，配制成质量浓度为400 μg/mL的溶液备用.注射用顺铂(DDP)：齐鲁医药有限公司；批准文号：国药准字H20023461；产品批号：WA2A1105005.将 DDP用生理盐水溶解解配，制成质量浓度为200 μg/mL溶液备用.空白对照组1为等体积PAMD溶剂.空白对照组2为生理盐水.

1.3 主要试剂

SYBR Premix Ex Taq 试剂盒：大连宝生物工程有限公司；PrimeScript RT试剂盒：大连宝生物工程有限公司；Trizol： Invitrogen公司；引物由上海捷瑞生物工程有限公司设计及合成：β-actin：上游5′-CGTGGACATCCGCAAAGAC-3′；下游5′-TGCATCCTGTCGGCAATG-3′，长度为84 bp；COX-2：上游5′-GCTCAGCCATACAGCAAATCC-3′；下游5′-TCCGGGTACAATCGCACTTAT-3′，长度为101 bp.

1.4 主要仪器

HDL型超净工作台：北京东联哈尔仪器制造有限公司；Z36HK型台式高速低温离心机：德国Hermle公司；iQ5实时荧光PCR仪：美国BIO-RAD公司；MyCyclerPCR仪：美国BIO-RAD公司.

2 实验方法

2.1 提取总RNA

取对数生长期的SGC-7901细胞，调节细胞浓度制成1×105个/mL的单细胞悬液，接种于培养瓶中；常规培养24 h后，更换含有10%药物的1640培养基，实验组PAMD终质量浓度为20、10、5 μg/mL，阳性对照组DDP为20 μg/mL，空白对照组1为等体积PAMD溶剂，空白对照组2为等体积生理盐水；……