杨 震 李 波 周焯家 简月奎 赵伟峰 田晓滨

(贵州省人民医院骨科，贵州 贵阳 550002)

脂肪间充质干细胞(ADSCs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞〔1〕,是组织工程中常用的一种成体干细胞，在一定条件下可以分化成脂肪细胞、成骨细胞、骨细胞、肌细胞、神经细胞等〔2～4〕。ADSCs与骨髓间充质干细胞(BMSCs)有相似的生物学特性，同时具有来源丰富、取材容易、对机体损伤小、体外增殖迅速和生物学性状稳定等优点〔5〕，是理想的组织工程和再生治疗的种子细胞，具有不可多得的优势和前景〔6〕。在体外试验中，可通过多种方式进行ADSCs成软骨的诱导，ADSCs 在软骨修复领域的巨大潜能〔7〕。本文成功分离和培养人(hADSCs)，并通过细胞载体复合物成功诱导hADSCs成软骨细胞分化。

1 材料和方法

1.1材料和试剂 脂肪组织来自贵州省人民医院手术提供，捐赠者无重大疾病史，经捐赠者同意，并经医院伦理委员会通过。Ⅰ型胶原酶购于美国Sigma公司；DMEM 培养基和胎牛血清(FBS)购于美国Gibco公司；鼠抗人CD29-PE、CD34-PE 、CD45-FITC购于美国BD公司，CD90-异氰硫酸荧光束(FITC)、CD105-FITC购于美国Sigma公司；兔抗骨唾液酸蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)、骨连接蛋白(ON)多克隆抗体、鼠抗人Collagen Ⅱ购于英国Abcam公司。

1.2方法

1.2.1hADSCs分离和培养 原代hADSCs分离：无菌条件收集脂肪组织， 磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3遍，剔除肉眼可见的血管及结缔组织，组织尽量剪碎至约1 mm3颗粒。加入2倍体积的1 mg/mlⅠ型胶原酶消化液(Sigma，美国)，置于摇床上，37℃消化30 min后加入等体积DMEM培养基终止消化。静置5 min后吸去上层成熟脂肪细胞， 1 200 r/ min离心5 min，留取下层片状沉淀，用DMEM重悬后200 目筛网过滤。……