孙雅彬 王大广 宋 鄂 叶 飞 张 泳 孙雅敏 徐越超

(吉林大学第一医院眼科，吉林 长春 130021)

Müller细胞是视网膜主要的神经胶质细胞，在生理和病理情况下均起到重要的作用。解剖发现，Müller细胞、神经元以及血管之间存在一种特殊的密切的生理关系，通过Müller细胞可以快速检测视网膜的自我平衡并做出回应〔1，2〕。视网膜是体内耗能最高的组织，Müller细胞通过新陈代谢为视网膜为提供代谢能量〔3〕。Müller细胞直接向高耗能的光感受器〔4〕运送营养，包括葡萄糖、乳酸盐、丙酮酸以及氨基酸〔5,6〕。与光感受器完全相反，Müller细胞对低氧、缺氧症以及低血糖症具有很强的耐受能力〔7〕。 Müller细胞通过糖原沉积，延长了其在有害环境下的生存期〔8〕。基于Müller细胞在视网膜中的重要作用，本研究通过体外培养的大鼠视网膜Müller细胞内信号传统通路的研究，为各种视网膜疾病的机制研究提供新的依据。

1 材料与方法

1.1Müller 细胞的形态学观察 根据我们的既往研究体外培养及鉴定大鼠视网膜Müller细胞〔9〕。于倒置相差显微镜下观察培养液有无污染，观察从大鼠视网膜分离出的Müller细胞贴壁情况，以及细胞在体外培养过程中的形态变化、生长特性等。

1.2蛋白通路分析 Müller 细胞(1×106) 于10 cm培养皿内无血清DMEM培养24 h。用1倍细胞裂解液(Cell Signaling Technology公司，美国Danvers)包含20 mmol/L Tris-HCl (pH7.5)，150 mmol/L NaCl，1 mmol/L Na2EDTA，1 mmol/L EGTA，1% Triton，2.5 mmol/L焦磷酸钠，1 mmol/L β-甘油磷酸钠，1 mmol/L Na3VO4，1 μg/ml亮抑蛋白酶肽，提取细胞总蛋白。 每个培养皿中加入300 μL裂解液，用细胞刮板刮除培养皿表面的单层细胞。细胞裂解产物超声裂解15 s，2次，14 000 r/min，4℃，离心30 min。BCA蛋白质分析试剂盒(Pierce公司，美国Rockford)检测蛋白质浓度。……