李平 聂舒 朱红梅 温海

(上海长征医院皮肤病与真菌病研究所全军真菌病重点实验室第二军医大学附属长征医院皮肤科，上海 200003)

新生隐球菌是一种环境腐生菌，常引起免疫功能受损人群的感染。中枢神经系统感染是隐球菌病最主要的临床表现，常表现为致命性的脑膜炎或脑膜脑炎(Cryptococcal meningitis/meningoencephalitis，CME)，是其高病死率的主要原因。关于隐球菌嗜中枢性机制的研究主要聚焦在血脑屏障与隐球菌作用前后某些基因表达和功能变化等方面，明确了不少促进隐球菌侵袭血脑屏障的关键基因，同时也建立了相对完美的体外血脑屏障模型，本文就有关问题作一阐述。

图1 血脑屏障体外模型示意图［6，8］Fig.1 The in vitro model of blood-brain barrier

1 血脑屏障的体外研究模型

血脑屏障主要由三种细胞组成:脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞和周细胞，三者共同组成紧密连接的网状结构，控制血液与中枢神经系统的物质交换。目前常用的体外血脑屏障模型是将单层脑微血管内皮细胞置于Transwell小室中培养［1-7］，再将Transwell小室置于12孔板或6孔板中培养，Transwell小室相当于血管腔一侧，而培养孔则相当于中枢神经系统一侧。研究时将隐球菌加于Transwell小室内，观察其穿过微血管内皮细胞层及Transwell微孔膜进入下方培养孔的能力(见图1)。Transwell小室底部是具有8 μm孔径的微孔膜，模拟了血管的基膜。微孔膜辅以胶原包被，再将血管内皮细胞种植于膜上培养，由于微血管内皮细胞之间可以形成紧密连接，基本上模拟了血脑屏障的结构。目前报道的有用原代人［1-3］、牛［4-5］内皮细胞及永生化的人内皮细胞系HCMEC/D3［6］和小鼠内皮细胞系 bEnd.3［7］。……