陈海雁, 张桂花, 罗锦彬, 黄舒婷

(广东省惠州市惠阳区人民医院 检验科, 广东 惠州, 516211)

乙型肝炎是中国常见传染性疾病之一，也是较严重的病毒性肝炎之一，严重危害人们的生活健康和生活质量[1]。乙肝病毒标志物(HBV-M)是目前中国临床判断病情及传染性的一项重要参考依据，能够反映患者对HBV病毒的免疫应答状态[2]。近年来随着分子生物学技术的发展，FQ-PCR技术在临床诊断和治疗中发挥着独特的优势，其可直接检测患者的HBV-DNA病毒含量，反映HBV复制及感染活性[3]。本研究通过HBV-M定性及HBV-DNA定量检测，探讨二者之间的关系及临床价值，现报告如下。

1 资料与方法

选取2013年4—12月在本院检测的乙肝患者653例，诊断标准：肝组织Knodell HAⅠ≥4，或≥G2/S2炎性坏死/纤维化，ALT≥2×ULN, 同时HBV-DNA呈阳性。男412例，女243例，年龄5～66岁，平均(36.42±6.45)岁, HBV-DNA检测试剂主要由中山大学达安基因股份有限公司生产，采用ROCHELIGHTCYCLER480型号的基因扩增分析仪; ELISA试剂盒购自上海科华公司。质控品由临检质控中心提供。

HBV免疫学检测：取受试者肘静脉血5 mL室温静置30 min, 离心5 min(25 cm, 3 000 rpm),采用ELISA法进行HBV-M模式的定性检测。检测顺序为: ① HBsAg; ② HbsAb; ③ HbeAg; ④ HbeAb; ⑤ HbcAb。根据上海热电MK3型酶标仪比色进行结果评定，严格按照试剂说明书进行检验操作及评定结果。

HBV-DNA定量测定：采用FQ-PCR法对HBV-DNA病毒含量进行测定。仪器型号为ROCHELIGHTCYCLER480型号(购自德国罗氏公司),FQ-PCR试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，定量测定范围在103～107，严格按照操作说明进行，结果真实可信。

2 结 果

2.1 ELISA检测HBV-M模式结果

本研究653例乙肝患者的血液标本中，HBV-M模式定性检测有以下8种模式：大三阳(1、3、5模式)197例，小三阳(1、4、5模式)252例，1、4模式95例，1、3模式19例，2、4、5模式25例，2、4模式13例，4、5模式19例，5模式33例。

2.2 HBV-DNA定量检测结果

以HBV-DNA表达水平高于1×103copies/mL为阳性。本研究653例血清样本中，HBV-DNA检测阳性率为54.82%(358/653)。

2.3 不同HBV-M模式下检测结果比较

大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97%和94.74%，显著高于其他模式(P<0.05)。大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平为(5.59×106±2.42×105), 显著高于其他模式(P<0.05)，见表1。

2.4 不同HBV-M模式HBV-DNA含量公布

以HBV-DNA表达水平进行分组，阴性组HBV-DNA<103; 低水平复制组HBV-DNA103～<104; 中水平复制组HBV-DNA104～<106: 高水平复制组HBV-DNA107～<109。不同HBV-M模式HBV-DNA表达水平分布见表2。

表1 不同HBV-M模式下检测结果比较

表2 HBV-M模式HBV-DNA含量分布比较

3 讨 论

中国流学病学调查表明，一般人群HBsAg阳性率约为9.1%，感染慢性乙肝病毒患者发生原发性肝癌危险性增加约3 000倍[4]。由于HBV感染具有极强的传染力，临床发病率较高，且部分患者易转变为慢性肝炎，在疾病进展过程中易继发肝硬化、肝癌等疾病，已成为世界性的一个严重公共卫生问题[5]。因此，寻找一种快速、准确的检测方法对于HBV感染的早期诊断、切断传播及予以及早治疗具有重要意义。

目前临床主要的检测方法有ELISA法、放射免疫法、FQ-PCR法以及化学发光法等[6]。ELISA法检测只能反映患者对HBV病毒的免疫应答状态，是HBV病毒感染的间接参考依据，对机体HBV感染复制情况及传染危险性反映不准确[7]。而FQ-PCR法对HBV-DNA表达水平的检测是HBV感染情况的最直接参考指标，其检测灵敏度、特异性较高，且能直接、动态地反映HBV病毒的复制状态及传染危险性[8]。但FQ-PCR法HBV-DNA定量检测对非复制状态下的感染情况反映不明确[9]，故临床上常联合检测。

大三阳是指乙肝表面抗原、核心抗体及e抗原检测同时阳性，即1(+)、3(+)、5(+)模式。本研究结果显示，从不同HBV-M模式HBV-DNA阳性检测率， 大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97%和94.74%, 显著高于其他模式(P<0.05)。大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平最高(5.59×106±2.42×105)，明显高于其他模式(P<0.05), 与林琳等[10]研究报道一致，说明了当1、3同时阳性时，患者体内HBV-DNA复制活跃，病毒传染性增加。因此，大三阳患者的病毒传染性强。本研究小三阳患者[1(+)、4(+)、5(+)模式]HBV-DNA阳性率为34.92%，显著低于大三阳97.97%阳性率(P<0.05); 但是HBV-DNA表达水平(4.18×105±1.53×104)仍较高。说明小三阳HBeAg已经转阴，HBV-DNA复制活跃性亦略低于大三阳组，但是机体内病毒复制并未停止，仍有传染性[11]。1(+)、3(+)模式的HBV-DNA阳性率为60%, 介于大、小三阳之间，有研究报道解释其可能是因HBV病毒基因第1 896位核普酸出现突变，使得前C区序列转录以及翻译受阻，因而HBeAg分泌减少，但患者HBV-DNA复制情况仍存在，临床也应加以重视[12]。2(+)、4(+)模式，4(+)、5(+)模式，5(+)模式的阳性率为0%。HBsAg、HBeAg转阴，HBsAb的产生说明了患者体内HBV病毒已经清除，HBsAb在HBV病毒清除时作用较大。2(+)、4(+)、5(+)模式下，机体已经产生了具有保护性作用的HBsAb, 或宿主免疫力低，既不表达抗原，也不产生抗体应答，因此阳性率亦较低[13]。以上4种模式，乙肝病毒基本不复制，传染性低。检测中常以HBV-DNA表达水平进行分组，阴性组(HBV-DNA<103)、低水平复制组(HBV-DNA103～<104)、中水平复制组(HBV-DNA104～<106)、高水平复制组(HBV-DNA107～<109), 进一步以HBV-DNA表达水平进行分组结果分析，不同HBV-M模式下阴性组、低水平复制组、中水平复制组、高水平复制组检测出的阳性率各不相同，但结论与HBV-M不同模式下阳性检测率完全一致。

综上所述，不同HBV-M模式的HBV-DNA表达水平及阳性率存在显著差异性，联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。

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